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前段時間去南京講課,碰到禾盛公司的劉總,說他手里有幾個抗衰老抗氧化的保健品,品質不錯,效果也好,進商超賣場沒這個實力,想借助專賣店方式進行推廣。言語間好像很有把握的樣子,“先搞專賣店試點樣板,然后再全國招商迅速鋪開市場您是專家,一定要指點指點啊。”在了解了相關產品情況后,我沉默片刻告訴他,去年我們藍哥智洋國際行銷顧問機構專門做過調查,在眾多以開專賣店運營的保健品或醫療器械中,失敗的占了七成,二成盈虧平衡,即使這樣優勢也很勉強,真正實現或大或小盈利的也只有一成,完全不是你想象中只要產品有效、品質保證加上針對中老年慢性病、多發病諸如此類保健品通過開專賣店就能達到順風順水,輕松盈利。由此看來,就我目前掌握的一些情況來看,你自身產品想通過專賣店營銷就能怎樣怎樣,目前只是海市蜃樓似的幻想。
大概是我一針見血觸痛了劉總原本滿懷希望的心理,他有些局促不安。我想,這不是壞事。
事實上也的確如此,現在一些保健品廠家,手里資金不多,總以為通過專賣店營銷產品門檻低、風險小、來錢快,于是,潛意識里認為簡單可行容易操作。可運作的結果,往往是大敗而歸。
不是說專賣店營銷不好,相反,非常可行而且是個方向。早在幾年前,我就曾經寫過許多類似的文章,這方面也積累了相當多的成功案例,《中國經營報》、《中國醫藥報》、《醫藥經濟報》、《中國食品報》等十多家媒體都曾予以刊登,在社會上引起較大反響。為什么我們運作的能夠成功,這是因為我們非常注重細節的把握和執行的到位,加上產品獨有的賣點、機理和概念烘托,以及根據產品本身背景定做的贏利模式和管理模式,對每個環節、每個過程的用心專注,對消費者每個反饋、每個要求的迅速回應包括售前、售中、售后服務的精細化、專業化、模式化,同時針對企業自身資源采用低成本營銷手段的推拉結合以便吸引眼球、聚攏人氣、引發購買等等。這樣做,你說不成功又怎么可能?
反觀我們有些企業老板。都是處在外行看熱鬧的份上,盲目樂觀,一知半解,到底想推廣什么還未明確就已經考慮怎么推廣了。你說,過了三個月,他還會笑得出來嗎?有道是看人挑擔不吃力,看看眼前晃過的一個個老板感覺似乎都挺瀟灑,假如事前缺乏規劃,你創業做老板試試。成功的概率會有多少?
有位專門從事多年保健品營銷工作的職業經理人老王,如今開了家掛著“中國國際健康科學研究院健康服務中心”名義實為銷售保健品的專賣店,在我的指導下漸入佳境,一年不到就添了一輛別克商務車。他為此由衷的對我說,“專賣店營銷看起來簡單,實際運作起來并不簡單。里面的門道和玄機多得很,所幸的是幸虧有您的幫助使我成功了,其他人我想倒霉的一定會很多。”可以說此言十分精辟。
但隨著市場向縱深發展,不少制造商直接參與并控制分銷渠道,掌控終端、渠道扁平化發展趨勢、大型商超賣場的迅速崛起使經銷商的地位日益尷尬。渠道變革正向深度分銷、現代物流配送方向發展,經銷商的輝煌將要走向分化或黯淡。“利潤越來越薄,已經淪為廠家的高級搬運工”“大型商超進入門檻越來越高、費用越來越大,結算越來越難”“資金周轉越來越慢現金流越做越小”已成為越來越多的經銷商的感慨。
筆者從事十多年的快速消費品營銷管理,也曾為多家知名企業進行營銷管理咨詢服務,曾和數百家各行業的經銷商打交道,對經銷商的成長、發展和面臨的問題具有很深的感受:
什么因素限制了經銷商的現金周轉?
一、選擇經銷產品失誤,出現推廣失敗或滯銷:由于大多數經銷都是私營或合伙經營,經營管理處于家族管理或靠感性決策的初級階段,選擇經銷品牌時靠感覺、感情、拍腦袋來作出選擇,經銷品牌失敗和滯銷的可能大大增加。 每一次選擇的失誤都會為自己造成不可想象的經濟損失和資金占壓。筆者認識的山東的一位做百貨經銷的朋友,因為早年供職于國營百貨站供銷科,積累了豐富的百貨行業經驗和營銷資源,在國營百貨站解體后,自己經營做經銷商,靠經營寶潔、大寶、丁家宜、索芙特等知名暢銷化妝品年營業額迅速上升,短短幾年積累了豐富的資金和網絡資源,一度成為山東百貨行業的龍頭經銷商。但是由于近幾年連續引進了幾個沒有推廣成功品牌,造成大量的庫存積壓,資金流動迅速減慢,經營也出現了很大困難,不得不收縮經營范圍。幾次交流都感慨萬分,“千萬要慎重引進品牌,我引進的三個失敗的品牌,每個都為我造成了近百萬的虧損,現在倉庫里還有幾百萬的庫存垃圾還要我不斷負擔倉儲費用”。經銷品牌的選擇失誤已經成為侵蝕經銷商利潤和造成資金困難的一大殺手。
二、壞帳、呆帳的比例上升:筆者接觸的經銷商大多沒有嚴格規范的帳目管理規范和財務分析制度。曾經在江西見過幾個做百貨經銷的客戶基本沒有帳目管理,所有的收貨、欠款收據都保存在隨身攜帶的公文包里,不可想象如果不慎公文包遺失,他靠什么去與客戶進行結算。還有一位經銷商朋友主要為幾家大型連鎖超市長期供貨,由于平時沒有認真去分析和管理,在一家超市出現經營虧損倒閉時,自己在里面的幾十萬貨款成了泡影,用他自己的話說,“幾年的經營利潤又給收回去了”。由于沒有完善的客戶管理體系和規范財務分析系統和有力貨款回籠措施,使得經銷商的應收款、呆帳、死帳遠遠超出企業的正常標準,從而造成資金周轉困難。
三、零售終端結算期的延長;大型商超、買場、商業連鎖的迅速崛起,其零售額已占絕對高的比例,使得零售終端的談判主動性大大提升。加上各生產廠家推廣產品時“占領終端,決勝終端”的趨勢,經銷商面臨廠家深度分銷、終端建設的壓力,不得不面對占主導地位的零售終端提出的苛刻的進場、陳列、結算政策。具了解絕大多數的零售終端與經銷商的貨款結算期在45—60天以上,并且還要在關系良好、公關能力強的基礎上。很多經銷商都面臨不愿做大場又不得不做大場的局面,很多經銷的現金流也被大型終端所累。
經銷商如何突破資金困境
選擇品牌失誤、呆帳死帳率升高、下游客戶結算期長已經成為經銷商資金周轉,現金流困難的三大主要因素。要突破資金壓力造成的經營困境,必須從選擇品牌、規范經營管理等方面進行改善和提升:
一、制定合理科學產品選擇評估流程,杜絕靠感覺、拍腦袋決策。根據對行業發展趨勢的把握分析和自身資源的評估,制定嚴謹的發展規劃和產品引進規劃,在引進經營產品時,充分考察和評估其發展前景,減少產品引進失誤。如在浙江的一家百貨經銷商,經營十多個世界知名百貨品牌,年銷售額上億,他成功的關鍵用它們自己的話說就是“我們選好了產品,我們經營的產品每個都必須也正在給我們帶來回報”;
關鍵詞:糖耐康;轉化生長因子-β1;人腎小管上皮細胞;結締組織生長因子;纖溶酶原激活物抑制物-1;基質金屬蛋白酶-9
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2013.06.011
中圖分類號:R285.5 文獻標識碼:A 文章編號:1005-5304(2013)06-0029-03
糖尿病腎病(DN)是糖尿病最為常見的慢性微血管并發癥之一,嚴重威脅著糖尿病患者的生活質量和生命健康。DN的發病機制目前尚未明確。既往認為DN的早期病變部位在腎小球,
基金項目:國家自然科學基金面上項目(30973909);北京中醫藥大學創新團隊項目(2011-CXTD-19)
通訊作者:劉銅華,E-mail:
近年來研究發現腎小管病變及腎間質纖維化的程度與腎功能的相關性更為密切,故腎間質纖維化的機制在DN的發展中越來越受到人們的重視[1]。調節纖維化細胞因子的正常表達在一定程度上能夠抑制纖維化的發展。人腎小管上皮細胞(HK-2)的結締組織生長因子(CTGF)、纖溶酶原激活物抑制物-1 (PAI-1)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)等纖維化細胞因子mRNA表達的影響,進一步探討其對腎間質纖維化的作用,為其防治DN腎間質纖維化提供實驗依據。
1 實驗材料
1.1 細胞株
HK-2購自蘭州大學實驗中心。
1.2 動物
Wistar大鼠24只,雄性,體質量(200±20)g,SPF級,甘肅中醫學院動物中心提供,許可證號:SCXK(甘)2004-0006。
1.3 藥物與試劑
DMEM/F12(1∶1)細胞培養基,Gibco公司;胎牛血清,Hyclon公司;EDTA、胰蛋白酶,Amresco公司。人重組TGF-β1,R&D System公司生產,根據說明書,用含1 mg/mL牛血清白蛋白的無菌弱鹽酸(4 mmol/L)配制為1 ?g/mL的儲存液,無菌EP管-70 ℃儲存,用時配成10 ng/mL濃度[2]。人CTGF、PAI-1、MMP-9 mRNA引物均由北京奧科生物技術有限責任公司合成。糖耐康顆粒,北京中醫藥大學提供,主要由人參、女貞子、夏枯草、三白草、番石榴葉等組成。每克粉劑相當于3.61 g原藥材,臨床成人用量為每日54.15 g原藥材,相當于0.902 5 g原藥材/kg。
1.4 儀器
CO2培養箱,HEAL CELL HL90,LIKANG;超凈生物安全柜,ESCD CLASSⅡBSC,Airstream;倒置顯微鏡,Olympus X-71, Olympus,JAPAN;PCR儀,型號ABI7300,ABI公司;紫外可見分光光度計,UV1100 5970019,上海天美科學有限公司。
2 實驗方法
2.1 糖耐康藥物血清制備
SPF級Wistar雄性大鼠24只飼養于中國人民總醫院屏障級動物實驗室[許可證號:SYXK-(軍) 2007-022],普通飼料喂養。隨機分為空白組、中藥組,每組12只。中藥組按成人臨床用量的10倍灌胃,空白組灌服同體積生理鹽水。每次1 mL/100 g體質量,上下午各1次,間隔12 h,連續灌胃3 d。于末次灌胃前8 h禁食不禁水;30 min后,大鼠股動脈無菌采血;靜置2 h,3000 r/min冷凍離心20 min,取上清,將同組血清混合;56 ℃水浴滅活30 min,-20 ℃低溫保存備用。
2.2 細胞培養
HK-2 細胞用含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100 ?g/mL鏈霉素 DMEM/F12(1∶1)完全培養基,于37 ℃、5%CO2細胞培養箱中培養。每隔2~3 d換新鮮培養基1次,培養融合至80% 以上,用含0.25%胰蛋白酶、0.05% EDTA的消化液消化,用完全培養基終止消化后,1000 r/min離心5 min。用新鮮培養基將細胞重懸后進行傳代培養。實驗前先用無血清培養基培養24 h使細胞同步化,實驗重復3次。
2.3 分組
傳代培養的HK-2細胞分為6組。空白對照組:DMEM/F12培養液;單純TGF-β1誘導組:DMEM/F12培養液+10 ng/mL TGF-β1;空白血清對照組:DMEM/F12培養液+10 ng/mL TGF-β1+10%空白血清;干預1組:DMEM/F12 培養液+10 ng/mL TGF-β1+5%糖耐康藥物血清;干預2組:DMEM/F12培養液+10 ng/mL TGF-β1+10%糖耐康藥物血清;干預3組:DMEM/F12 培養液+10 ng/mL TGF-β1+20%糖耐康藥物血清。
2.4 人腎小管上皮細胞結締組織生長因子、纖溶酶原激活物抑制物-1及基質金屬蛋白酶-9 mRNA表達檢測
細胞以6000個/孔的密度接種于96孔板中,每孔200 ?L,每組設3個復孔,培養過夜。吸棄細胞上清,加入無血清培養基同步化24 h。再次棄細胞上清,按照分組加入相應藥物的培養液200 ?L,繼續培養24 h。提取RNA進行PCR實驗操作。
總RNA抽提:①用槍頭吸盡培養基,向各孔中加入125 ?L×2的Washing Buffer。②用槍頭吸盡Cell AmpTM Washing Buffer,后向各孔中加50 ?L Processing溶液,反復吹打Processing液后,移至微量離心管中。③75 ℃水浴5 min,分裝得到的細胞裂解液。將提取出的總RNA進行完整性分析及純度測定。
反轉錄反應:根據RT反應體系(見表1),于PCR管中相應體積的5×PrimeScriptTM Buffer,PrimeScriptTM RT Enzyme Mix Ⅰ,Oligo dT primer(50 ?mol/L)×1,Random 6 mers,RNase Free dH2O分裝,再加入RNA樣品,迷你離心機混勻,進行PCR反轉錄反應:37 ℃、15 min,85 ℃、5 s,反轉錄所得產物為模板cDNA,-20 ℃保存以備后續擴增用。此過程均在冰上操作。
PCR擴增反應:根據PCR反應體系組份(見表2),于PCR管中加入相應體積的SYBR Premix Ex TapⅡ(2×),PCR Forward Primer(10 ?mol/L),PCR Reverse Primer(10 ?mol/L),dH20和cDNA模板,迷你離心機混勻。兩步法PCR擴增程序:預變性95 ℃、31 s;95 ℃、5 s,64 ℃、40 s,50個循環。上述組份在冰上配置。
β-actin作為對照,熒光實時PCR反應結束后,由系統分析軟件確定閾值,進而確定各反應樣本的CT值,采用相對定量的2-CT法分析PCR結果,確定各樣本之間基因的表達差異。
3 統計學方法
采用SPSS13.0統計軟件進行分析。結果用―x±s表示,數據符合正態分布,采用方差分析。P
4 結果
HK-2細胞經TGF-β110 ng/mL作用24 h后,促纖維化細胞因子CTGF、PAI-1 mRNA的表達顯著增強,抗纖維化細胞因子MMP-9 mRNA表達減弱,與空白對照組比較,差異有統計學意義(P
5 討論
現代醫學針對腎間質纖維化的防治措施主要有應用血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素受體拮抗劑、TGF-β1中和抗體或天然拮抗劑、基因治療等諸多方面。但其抗腎纖維化效果并不理想。近年來, 中醫藥從扶正固本、活血化瘀、清熱利濕、化濁排毒等多個角度,由單味中藥、中藥有效成分及中藥復方制劑多方面進行抗纖維化的實驗及臨床研究,取得了一定的效果[3-4]。
目前研究發現,CTGF作為TGF-β的下游因子,是TGF-β活性的重要調節者,它與其受體結合誘導成纖維細胞增生、基質蛋白質合成及整合素的表達。在人活檢標本組織損傷嚴重區域CTGF表達增加。研究發現,CTGF抗體或反義寡核苷酸可減少TGF-β刺激成纖維細胞和腎小球系膜細胞產生細胞外基質[5]。PAI-1是血液中纖溶酶原激活劑最有效的生理性抑制劑,可由腎小管上皮細胞和肌成纖維細胞產生,TGF-β可促進它的表達,增加PAI-1的量可以明顯減少纖溶酶的產生,而纖溶酶可以降解多種基質蛋白――Ⅳ型膠原、纖維結合素、層黏素、蛋白多糖以及纖維蛋白;它可以激活MMPs及膠原蛋白降解酶[6]。因此,PAI-1可以調節腎小球膜內基質的量,在促腎間質纖維化過程中發揮重要作用[7]。MMPs是一族鋅、鈣依賴肽鏈內切酶。MMPs以酶原形式分泌,體內被激活的機制不清楚,體外可被纖溶酶原、激肽釋放酶、組織蛋白酶G及尿激酶激活。MMPs具有降解基質蛋白沉積的作用[8-9]。
糖耐康是治療糖尿病的臨床經驗方。既往的研究表明,糖耐康具有調節糖尿病小鼠糖代謝、提高胰島素敏感指數、減輕胰島素抵抗、促進胰島β細胞的修復和再生、調節脂代謝異常等作用[10]。我們以往的研究發現,糖耐康能夠抑制高糖誘導大鼠腎小球系膜細胞的增殖,并能降低糖尿病GK大鼠尿蛋白量[11-12],表明糖耐康對DN的發生和發展具有一定的治療作用。
本實驗主要探討了糖耐康對TGF-β1誘導的人腎小管上皮細胞轉分化過程中促纖維化細胞因子CTGF、PAI-1和抗纖維化細胞因子MMP-9的作用。結果顯示,人腎小管上皮細胞HK-2經TGF-β1誘導后,其纖維化促進因子CTGF、PAI-1 mRNA的表達顯著上升,而纖維化抑制因子MMP-9 mRNA的表達逐步減弱,再次證實了TGF-β1與腎間質纖維化發生的相關性。經糖耐康藥物血清干預后,CTGF、PAI-1 mRNA的表達逐步下降,而MMP-9 mRNA的表達逐步上升,說明糖耐康在腎間質纖維化過程中具有調控纖維化細胞因子網絡的作用,在一定程度上可以抑制纖維化的發展。
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——題記
開門
我推開門,就面對著一個陌生的世界——我看見像黑夜那樣模糊的黑板跳躍在墻角上,她的黑,很黑很黑,那種黑,是盲人的黑,她告訴我,一切就要開始;我還看見像閱兵那樣整齊的課桌暗笑的躲藏在角落,那種笑,是很藍很藍的淺笑,是歡迎的笑,她告訴我,一切就會結束。于是,我推開門,我就哭了,我的眼睛很透徹,一哭,就把我的心照了個干凈,我第一次感到——淚水就是咸的,他就是咸的,讓人啞然的咸,這樣,我就不敢再哭了,我只能無助的回首,看那個遲遲不肯久退的媽媽,我無助的看,又無助的轉身,因為媽媽,她用她更加透徹的眼睛告訴我——轉過身,面對。
我一次次推門,又一次次轉身,直到我看見我的媽媽漸漸漸漸的消失在大門口,并且我還知道,在拐彎處,她轉了一次身。
我轉身,勇敢的面對課堂。
敲門
我來到門前,端起手——我才終于知道為什么很多人說,這道門這么難叩響,它一點也不像法拉姐妹的城堡,古老,陰森,也一點都不貌似童話故事里的皇宮那么富麗堂皇,可是我面對它,還是好像面對著一座難以移開的山,我忍不住回首,又轉身仰望,我知道它是那么的高,那么的寬闊,它無不熱情的歡迎著前來敲門的人,可我又在一次次轉身企盼之間漏掉了我的自信,像漏掉一粒粒沙。它五彩斑斕,又不乏古老,在它底下,我終于感到自己的渺小,在時間的隧道里,我不只一次的望見失望的影子,我總是被他打到,然后鼻青臉腫的爬起來,翹首企盼那一場大雨,我想,我不能再這樣了,因為這樣,我會感到自己的不爭氣,我不再回首,不再轉身,我擦干眼淚,我了解:一切都將開始。
我再次不舍的轉身,因為我知道我將敲響我永遠永遠不可能再轉身的——那一扇青春之門。
關門
我面對著你們,你們叫我怎么??我怎么?,都不會兩全其美。我就這么傻傻的望著你們么?你們渴望我像開門時的不舍和轉身,渴望我像敲門時的企盼和留念,渴望我的回首和淚流滿面,不,我說,不,因為路燈都滅了,因為鳥兒都歸巢了,因為天都黑了,夜都深了,因為我現在有一扇將要關上的門了。
我還是傻傻的面對你們么?我的父母,我把這扇隱形之門關上之后,在我轉身了,回首了,企盼了,不舍了,留念了之后,我所能做的就是關門,關上這扇讓你們永遠疼愛的大門,我就可以獨立,可以自己承擔風雨和責任,可以不時的關心你們,可以從你們嘴里聽到的,不是寶貝,是我的名字了!
我面對著你們,我看到了我,我的不舍的淚——正在消失。
于是,我微笑著關上了門,你們看見我邁步向中學走去,我看見你們在微笑!可我不再轉身。
看著雪白的梨花,沉默地思考著我此時的心情。“姐,梨花漂亮不?今年的梨花開的好早,很漂亮很漂亮!”你眼中跳躍著的光,一瞬間穿越的一切。那樣天真的笑,那樣簡單的喜歡,沒有那么多的雜念,沒有那么多的束縛,因為想到了,因為喜歡,便可以開心的去做,即便是在清明雨下。
揚起頭看著灰白色的天空,站在清明雨下。那時有個女孩不知清明的來歷,不懂掃墓所謂何意……因為簡單的感覺雨是那樣的清爽,便離開了正在前進的人群,轉身奔向身后沒有石碑的地方,因為那里可以更自由的跑著,笑著!
低下頭收斂了思緒,我笑了。“好漂亮的梨花,姐姐好喜歡,走帶姐看看那片梨園,姐好久都沒有去過了。”瞬間發現弟弟的微笑有著那樣強的魔力,那樣迷人。你轉身,帶我再走入那片自由的曾經……
清明。青的柳,清的雨,輕的風。輕描了曾經的微笑;冥的傷,明的眸,命的淚。命中了逝去的悲傷!
花開清明,是紀念
紀念曾經的天真,
紀念逝去的美好,
花開清明,是思念