酸漿多糖提取工藝論文

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1材料與方法

1．1供試品溶液的制備取酸漿粗多糖置于50mL錐形瓶中，加適量純水，沸水浴使溶解，趁熱過濾，并用熱水洗殘渣，將洗液與錐形瓶中溶液混合，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得。

1．2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取葡萄糖10．31mg，置于10mL容量瓶中，加適量水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取0．0、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8mL于25mL比色管，分別加水補(bǔ)1．0mL。上述溶液分別加3，5-二硝基水楊酸試液1．5mL，于沸水浴中加熱5min，流水冷卻，加水稀釋至25mL刻度。以相應(yīng)溶液為空白，在520nm處測定吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．3酸漿果實中多糖含量的測定精密量取供試品溶液2．5mL，置于50mL錐形瓶中，加水2．5mL，加6mol/L鹽酸溶液5mL，在沸水浴中加熱30min，用流水冷卻后加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得總糖溶液。精密量取供試品溶液5mL，置于10mL容量瓶中，加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，加水至刻度，搖勻，即得單糖溶液。精密量取上述總糖溶液和單糖溶液1mL，分別置于10mL具塞刻度試管中，加純水至2mL，分別精密加入3，5-二硝基水楊酸試液2mL，混勻，在100℃水浴中加熱5min，取出，立即用冰水浴冷卻至室溫，加水3mL搖勻。用相應(yīng)的試劑作空白，照分光光度法在520nm處依法顯色，測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中計算出總糖和單糖濃度，由總糖含量減去單糖含量，即得多糖的含量。

1．4單因素實驗設(shè)計選擇料液比、醇沉濃度、提取時間、提取次數(shù)4個影響因素進(jìn)行單因素實驗，其中料液比分別為1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，醇沉濃度分別為55%、65%、75%、85%、95%，提取時間分別為1h、1．5h、2h、2．5h、3h，提取次數(shù)分別為1、2、3次。

1．5正交實驗設(shè)計根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及單因素實驗，選擇料液比、醇沉濃度、提取時間、提取次數(shù)4個影響因素，每個因素取3個水平，以多糖提取率為主要考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行實驗。

2結(jié)果

以粗多糖的含量為指標(biāo)，在料液比為1∶60、乙醇濃度為85%、提取時間2．5h、提取次數(shù)為2次時，提取出的多糖含量最高。單因素實驗設(shè)計的因素水平見表1，正交實驗表如表2。按照上述最佳提取工藝提取條件，對一組樣品進(jìn)行驗證，測定多糖的提取含量為10．5353、10．5533、10．7517、10．5866、10．6721mg/g。

3討論

在本實驗中采用熱水提取法，料液比1∶60，醇沉濃度為95%，提取次數(shù)為2次，提取時間為1．5時提取率最高。測定多糖含量采用的3，5-二硝基水楊酸法不使用硫酸，分別測定總糖和單糖的含量后，進(jìn)而計算出樣品中酸漿多糖的含量，方法學(xué)驗證表明，該法精密度、重現(xiàn)性等良好，是一種簡便、實用的有效分析方法。此外，應(yīng)用3，5-二硝基水楊酸法時，還應(yīng)注意，樣品測試液制備過程中，酸水解必須控制適宜時間，時間短則多糖水解不完全，時間長則單糖和鹽酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成糖醛，不能和3，5-二硝基水楊酸發(fā)生縮合反應(yīng)。

作者：馬洪波單位：吉林醫(yī)藥學(xué)院