HPLC法測定小葉榕葉中異牡荊苷含量

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【摘要】目的建立小葉榕葉中異牡荊苷的含量測定方法，并比較不同采收期小葉榕葉的異牡荊苷的含量差異。方法用hplc法進(jìn)行測定，流動相為甲醇水（38∶62），檢測波長為270nm。結(jié)果不同采收期藥材異牡荊苷最高含量達(dá)0.69％，最低為0.18％，7～12月份含量明顯高于其他月份。結(jié)論該方法簡便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適于小葉榕葉中異牡荊苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；小葉榕葉；異牡荊苷；采收期

Abstract:ObjectiveTodevelopaquantitativemethodtodetermineisovitexininFoliumFiciMicrocarpae,andtocomparethecontentofisovitexininFoliumFiciMicrocarpaeofdifferentgrowthstages.MethodsHPLCmethodwasusedbyusingMeOHH2O(38∶62)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwasat270nm.ResultThehighestcontentofisovitexinfromdifferentgrowthstageswas0.69%,andthelowestwas0.18%.Thecontentsin7-12mothsweresignificantlyhigherthanothermonths.ConclusionThismethodwassimple,quickandaccuratefordeterminationofisovitexininFoliumFiciMicrocarpae.

Keywords:HPLC;FoliumFiciMicrocarpae;isovitexin

小葉榕葉FoliumFiciMicrocarpae，又名小榕葉、落地金錢，來源于桑科榕屬植物榕樹（FicusmicrocarpaL.f.）的葉。小葉榕葉為民間常用中草藥，其味淡，性涼，具有清熱發(fā)表、解毒消腫、祛濕止痛的功效［1］。用于治療哮喘和慢性支氣管炎，在治療心血管疾病、抗炎、抑菌等方面也都有顯著的效果［2］。其中主要含黃酮、三萜類和甾體化合物等化學(xué)成分［3］。小葉榕葉中的黃酮類成分主要為異牡荊苷（另文報道）。本實驗采用HPLC法，建立了小葉榕葉中異牡荊苷的含量測定方法。該方法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好，適用于本品的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

美國Waters高效液相色譜儀：Waters600型泵，2487型紫外檢測器，Empower工作站。賽多利斯電子天平。

小葉榕藥材采自廣州，在一年中各月份分別采集，所有樣品由廣東藥學(xué)院房志堅副教授鑒定為桑科榕屬植物小葉榕FicusmicrocarpaL.f.的葉。對照品異牡荊苷為自制，經(jīng)UV、氫譜、碳譜鑒定（另文報道），并利用HPLC歸一化法分析其純度達(dá)99.48%。甲醇（色譜純，天津科密歐公司），其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1色譜條件

GracesmartC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇水（體積比38∶62）；柱溫：25℃；流速：1.0mL/min；檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：20μL。

2．2對照品溶液的制備

取異牡荊苷對照品適量，精密稱定，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇溶解，配制成每1mL含異牡荊苷21.6μg的溶液，以此作為對照品溶液。

2．3供試品溶液的制備

取本品粉末（過20目篩）約1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)50％甲醇50mL，稱定重量，加熱回流40min，放冷，再稱定重量，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液10mL，通過聚酰胺柱（60～80目聚酰胺約2g，裝于內(nèi)徑1.5cm的小柱），以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇洗脫，洗脫液收集于100mL量瓶，并以洗脫液定容至刻度，搖勻，即得。

2．4線性關(guān)系考察

分別精密量取“2．2”項下對照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.5，5.0和10.0mL置10mL量瓶，加體積分?jǐn)?shù)50%甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，分別為11565、21718、44185、88508、153526、221861、458014，依峰面積（A）與質(zhì)量濃度（ρ）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得回歸方程為A=21171ρ-2585.1，r=0.9996，表明異牡荊苷質(zhì)量濃度在0.54～21.6μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

．5精密度試驗

精密吸取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，求得RSD值為0.73％，表明精密度良好，結(jié)果見表1。

2．6穩(wěn)定性試驗

對同一供試品溶液，分別于0，2，4，12，24h進(jìn)樣，測定異牡荊苷峰面積，求得RSD值為1.84％，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表1。

2．7重復(fù)性試驗

取同一批號樣品5份，按供試品溶液制備方法平行處理，依法測定，求得RSD值為0.42％，表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表1。表1精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗測定結(jié)果（略）

2．8回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品數(shù)份，精密加入一定量的對照品溶液，依法測定，計算平均回收率為100.51％，RSD值為4.50％，結(jié)果見表2。表2回收率試驗測定結(jié)果（略）

2．9樣品含量測定

分別取不同采收期的樣品按供試品溶液制備方法處理，依法測定，計算含量。結(jié)果見圖1及表3。表3不同月份小葉榕葉中異牡荊苷的含量（略）

3討論

3．1異牡荊苷為小葉榕葉中含量較高的黃酮類藥效組分之一，故將其作為小葉榕葉質(zhì)量評價的指標(biāo)成分。異牡荊苷在270nm處有最大吸收［4］，故選擇該波長為測定的波長。實驗曾比較不同比例的甲醇作為提取液，以體積分?jǐn)?shù)50％甲醇的提取液峰面積較高，雜質(zhì)較少，確定選用體積分?jǐn)?shù)50％甲醇回流提取。提取液通過聚酰胺柱能有效去除雜質(zhì)，減少對色譜柱的損害。

3．2本試驗考察了不同采收月份藥材的情況，結(jié)果表明，小葉榕葉中異牡荊苷成分的含量在1～6月份較低，在7～12月份較高。該結(jié)果為小葉榕葉的合理采收和利用提供了理論依據(jù)。對于不同采收年限，不同產(chǎn)地的藥材還有待于進(jìn)一步考察。

3．3本研究建立了小葉榕葉中異牡荊苷含量的測定方法。線性關(guān)系及重現(xiàn)性良好，方法穩(wěn)定準(zhǔn)確，可作為小葉榕葉的質(zhì)量控制方法，為進(jìn)一步研究其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機理打下了基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］趙守訓(xùn).中藥辭海：第三卷［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,1997：1334.

［2］國家中醫(yī)藥局《中華本草》編委會.中華本草：第三冊［M］.上海：上海科技出版社,1999：495-497.

［3］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典：下冊［M］.上海：上海科技出版社,1977：2529.

［4］中國科學(xué)院上海藥物研究所植物化學(xué)研究室.黃酮體化合物鑒定手冊［M］.北京:科學(xué)出版社,1981：437-439.