止痢寧片苦參堿HPLC測定

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【摘要】目的用HPLC法測定止痢寧片中苦參堿的含量。方法hplc用外標一點法，KromasilNH2柱，乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）為流動相，流速為1.0ml/min，λ=220nm。結(jié)果苦參堿在0.052125～0.417mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性，回歸方程為Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6），平均加樣回收率98.0%，RSD為0.72%（n=6）。結(jié)論方法簡便、準確，專屬性強，測定結(jié)果重復(fù)性好，為止痢寧片中苦參堿的定量分析提供了科學(xué)有效的方法。

【關(guān)鍵詞】止痢寧片；苦參堿；HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofMatrineinZhiliningpianbyHPLC.MethodsUsingKromasilNH2Column,Acetonitrile-Ethanolabsolute-3%Phosphoricacidglacial（80∶10∶10）asthemobilephase,detectionwavelengthas220nmandflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof0.052125mg/ml～0.417mg/mlfortheMatrineandlinearequationwasY=5411430.52X-8349.86r=0.9997.Theaveragerecoverywas98.0%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was0.72%（n=6）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofMatrineinZhiliningPianandthereduplicationoftheresultwasgood.

【Keywords】ZhiliningPian；matrine；HPLC

止痢寧片收載于部頒藥品標準中藥成方制劑第四冊中，功能主治：清熱祛濕，行氣止痛。用于腸炎、痢疾，表現(xiàn)為腹痛瀉泄，下痢膿血，肛門灼熱，里急后重者［1］。處方由穿心蓮、苦參、木香組成，原標準中只有檢查項，沒有含量控制項。為了更好地控制止痢寧片的質(zhì)量，提高止痢寧片的質(zhì)量標準，筆者對止痢寧片處方進行了分析，經(jīng)過預(yù)試驗及參考相關(guān)資料，進行本品中苦參堿含量測定，并進行了方法學(xué)研究，控制藥品質(zhì)量。采用高效液相色譜法測定苦參堿含量，方法簡便快速，穩(wěn)定可靠，專屬性強。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相譜儀：SPD-10A日本島津；紫外分光儀：上海康化生化儀器制造廠；超聲波清洗器：SK3200H上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司。

1.2試藥苦參堿對照品（批號110805-200306）由中國生物制品檢定所提供；止痢寧片（批號：20070601、20070602、20070603）由河南百年康鑫藥業(yè)有限公司提供；止痢寧片對照藥品（批號：20060501）由江西某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件［2］以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）為流動相；檢測波長為220nm；流速為1ml/min；柱溫為室溫。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于2000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇（80：20）溶液，制成每毫升含苦參堿0.20mg的溶液，即得。色譜圖見圖1。

圖1苦參堿對照品色譜圖

2.2.2供試品溶液的制備取本品20片，研細，取0.5g，精密稱定，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液50ml振搖使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷15ml振搖提取1次，棄去三氯甲烷提取液，水層用氨試液調(diào)至強堿性，用三氯甲烷提取4次（15、10、10、10ml），合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣用乙醇適量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。色譜圖見圖2。

圖2止痢寧片色譜圖

2.2.3陰性樣品的測試取缺苦參的樣品，按供試品制備法制備陰性樣品后測定，在苦參堿相應(yīng)位置無峰出現(xiàn)，說明陰性樣品的其他成分無干擾。色譜圖見圖3。

圖3陰性樣品色譜圖

2.3線性關(guān)系的考察精密稱苦參堿對照品適量，用乙腈-無水乙醇（80：20）溶液稀釋制成不同濃度的對照品溶液，分別為0.052125、0.10425、0.156375、0.2085、0.31275、0.417mg/ml，各進樣10μl，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，苦參堿的濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程Y=5411430.52X+8349.86，r=0.9997（n=6）,表明苦參堿在0.052125～0.417mg/ml之間呈良好的線性關(guān)系。

2.4精密度試驗取濃度為0.2085mg/ml的苦參堿對照品溶液，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，測定結(jié)果RSD為1.44%，表明精密度良好。

2.5重現(xiàn)性試驗取本品20片（批號：20070601），稱取總重后研細，分別稱取6份，每份0.5g，精密稱定，然后按供試品溶液制備方法制備供試品溶液。按照含量測定方法，測定每份樣品中苦參堿的含量，結(jié)果RSD為1.66%，重現(xiàn)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗取本品20片（批號：20070601），研細，稱取0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h測定峰面積，RSD為1.79%（n=5）。表明制備的供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗取本品20片（批號：20070601），稱取總重后研細，分別稱取6份，每份0.25g，精密稱定。分別置之50ml量瓶中，精密加入用0.1mol/L鹽酸溶液配制濃度為0.763mg/ml的苦參堿對照品溶液1.0ml，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進樣量10μl，測定苦參堿含量，平均回收率為98.0%，RSD為0.72%（n=6）。見表1。表1加樣回收率試驗

2.8樣品測定按照供試品溶液制備方法對3批中試產(chǎn)品進行測定，測定結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果

3討論

根據(jù)含量測定結(jié)果，每片含苦參以苦參堿（C15H24N2O）計，均不少于1.1mg,由于各地苦參藥材的差別較大，因此暫規(guī)定：本品每片含苦參以苦參堿（C15H24N2O）計，不少于1.0mg。

在止痢寧片處方中，君藥為穿心蓮，其主要成分為穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯，《中國藥典》2005年版一部穿心蓮藥材就是以此成分控制穿心蓮藥材質(zhì)量，為控制止痢寧片質(zhì)量也擬測定止痢寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量來控制產(chǎn)品質(zhì)量，但在陰性樣品試驗中，在與穿心蓮內(nèi)酯對照品相應(yīng)位置出現(xiàn)了嚴重干擾。

供試品溶液制備方法的考察：為了考察擬定供試品溶液制備方法的合理性，分別取3份樣品，精密稱定，按供試品溶液處理方法處理，在最后用三氯甲烷萃取時分別萃取3次（15、10、10ml）、4次（15、10、10、10ml）、5次（15、10、10、10、10），測定供試品溶液的含量，結(jié)果表明，萃取3次結(jié)果偏小，而萃取4次和萃取5次結(jié)果區(qū)別不大，故采用萃取4次。

【參考文獻】

1中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第四冊.北京：衛(wèi)生部藥典委員會，1991，35.

2國家藥典委員會.中國藥典，2005年版一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，141.