ELSD法測定注射用硫酸異帕米星含量

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【摘要】目的建立高效液相色譜蒸發光散射檢測(HPLCelsd)法測定注射用硫酸異帕米星含量的方法。方法色譜柱為ZorbaxSBC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動相為1%三氟醋酸水溶液甲醇(體積比95∶5)),流速:0.5mL/min;蒸發光散射檢測器,漂移管溫度45℃,載氣壓力368Pa。結果異帕米星在0.1~0.8mg/mL的范圍內呈較好的線性關系(r=0.9995),平均回收率101.0%,RSD=0.32%;系統精密度RSD=0.34%。結論本方法操作簡便、快速，方法的精密度、準確性、重現性均較好地滿足質量控制的要求，可用于注射用硫酸異帕米星的質量控制。

【關鍵詞】高效液相色譜法;蒸發光散射檢測器;硫酸異帕米星

Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCELSDmethodforthequantificationofisepamicinsulfateintheinjection.MethodsTheanalysiswasperformedonacolumnofZorbaxSBC18(250mm×4.6mm,5μm).Themobilephaseconsistedof1%tifluoroaceticmethanol(95∶5)andtheflowratewas0.5mL·min-1.Thedrifttubetemperaturewas45℃，ELSDwasusedasthedetectorwithpressureofnebulizinggasof368Pa.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1~0.7mg/mL(r=0.9995).Theaveragerecoverywas101.0%withRSD0.32%.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandreproducibleforthequalitycontroloftheinjectionofisepamicinsulfate.

Keywords:HPLC;evaporativelight-scatteringdetection;isepamicinsulfate

硫酸異帕米星為氨基糖甙類抗生素,由慶大霉素B半合成而來，目前僅在日本抗生素基準解說（簡稱“日抗基”）中收載。“日抗基”中采用抗生素微生物檢定法測定硫酸異帕米星的含量,操作煩瑣、測定誤差較大。由于氨基糖甙類抗生素無紫外吸收,無法采用紫外檢測器，因此,通常采用衍生化的方法進行測定［1~2］，但該法操作煩瑣、費時,而且反應過程中可能會產生副產物,干擾有關物質的測定。蒸發光散射檢測器（ELSD）是一種通用型質量檢測器,其響應不依賴物質的光學特征,對無紫外或紫外末端吸收的有機化合物的檢測顯示出極大的優越性。有文獻報道用蒸發光散射檢測器進行氨基糖甙類抗生素的質量分析［3］。本研究建立了在酸性條件下HPLCELSD法測定注射用硫酸異帕米星含量的方法,測定結果與“日抗基”中收載的微生物檢定法的測定結果基本一致。

1材料與方法

1.1儀器與試劑島津高效液相色譜系統2010CHT型和SEDEX75型蒸發光散射檢測器;ZorbaxSBC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)。三氟醋酸為TEDIACOMPANYINC產品,分析純;水為自制雙蒸水。硫酸異帕米星標準品（規格：684mg/g,批號：050701）及注射用硫酸異帕米星由海南長安國際制藥有限公司提供。

1.2色譜條件采用1%三氟醋酸水溶液甲醇(體積比95∶5)為流動相,流速為0.5mL/min;ELSD檢測器漂移管溫度為45℃,載氣壓力368Pa;進樣量20μL。

1.3溶液的配制

1.3.1標準品溶液的配制取硫酸異帕米星標準品,精密稱定,用水溶解,分別制成濃度為0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg/mL的標準溶液,每個濃度平行配制2份。

1.3.2供試品溶液的配制取供試品注射用硫酸異帕米星,精密稱定,用水溶解,制成濃度為0.5mg/mL的溶液,平行配制6份。

1.4方法學考察

1.4.1線性關系精密稱取異帕米星對照品適量,加水制成含注射用硫酸異帕米星0.1、0.2、0.4、0.6及0.8mg/mL的溶液,分別進樣20μL,以濃度的常用對數（X）為橫坐標,以峰面積的常用對數（Y）為縱坐標作圖,計算得回歸方程：Y=1.2496X+5.663，r=09995。結果表明異帕米星在0.1~0.8mg/mL的范圍內呈較好的線性關系。

1.4.2精密度試驗取對照品溶液,連續進樣6針,以主峰峰面積計算RSD為0.34%。

1．4．3穩定性試驗取供試品（批號051101）溶液,分別于0、1、2、4、6、8h取20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結果RSD為0.78%。

1．4．4重復性試驗取同一批供試品（批號051101），配制成6份溶液，分別進樣分析，含量測定結果的RSD為0.6%(n=6)。

1.5回收率試驗精密稱取已知含量的注射用硫酸異帕米星適量（高、中、低各3份）和與之相對應量（按注射用硫酸異帕米星處方比例）的硫酸異帕米星標準品9份，分別置于100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，取20μL注入液相色譜儀進行測定,計算回收率，測得回收率分別為100.8%、100.9%和101.4%，平均回收率為101.0%，RSD為0.32%,表明回收率良好。

2含量測定結果

采用本法測定3批注射用硫酸異帕米星的含量；按企業申報的質量標準測定方法，采用微生物檢定二劑量法測定注射用硫酸異帕米星的含量，結果見表1。結果表明兩種方法的含量測定結果非常接近。硫酸異帕米星供試品溶液的色圖譜見圖1。

3討論

3.1本文所建立的HPLCELSD方法與目前中國藥典采用的效價方法及英、美等國家采用的衍生化方法比較，具有以下優點:不需要進行衍生化，減少了樣品前處理所帶來的誤差，提高了分析的精度。

表13批樣品HPLCELSD法與微生物檢定法測定結果（略）

Tab.1ContentofisepamicinsulfatedetectedbyHPLCELSDandantibioticsmicrobialassays,separately

1.硫酸根;2.異帕米星

圖1硫酸異帕米星測定HPLC色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatigramofisepamicinsulfate

3.2已有文獻報道采用0.05mol/L五氟丙酸溶液甲醇系統為流動相測定硫酸異帕米星原料的含量［3~4］，未見對注射用異帕米星的含量進行測定的文獻報道，本文參照硫酸小諾霉素注射液的小諾霉素組分測定方法［5］建立了測定注射用異帕米星含量的HPLCELSD法，結果表明本法可靠、可行。

【參考文獻】

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［2］MAYUMIS,KOICHIROK,EIKOY,etal.Columnliquidchromatographicdeterminationofisepamicininnavityusinggauze［J］.JChromatogr,1990,529:473-475.

［3］王明娟,成雙紅,張斗勝，等.HPLCELSD法測定異帕米星含量［J］.中國抗生素雜志，2003，28（1）：20-21.

［4］王建,洪利婭,倪坤儀,等.高效液相色譜蒸發光散射檢測法測定硫酸異帕米星及其有關物質的含量［J］.分析化學,2006（1）:19-22.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部［M］.北京：化學工業出版社，2005:719.