HPLC法測定輕身消胖丸鹽酸麻黃堿含量

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【摘要】目的建立輕身消胖丸中鹽酸麻黃堿的定量方法。方法采用RPhplc法，色譜柱：WatersXTerraC18(4.6mm×250mm,5μm)不銹鋼柱；流動相:1%磷酸溶液(含0.4%三乙胺)乙腈(體積比91∶9)；流速：1.0mL/min；檢測波長：207nm；柱溫：35℃。結果鹽酸麻黃堿的進樣量在16.6～166μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，鹽酸麻黃堿的平均回收率為98.40%(n=6)，RSD為1.2%。結論方法簡單快速、專屬性強、重復性好、精密度高，可用于控制該制劑的質(zhì)量。

【關鍵詞】輕身消胖丸;鹽酸麻黃堿;RPHPLC;含量測定

Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforcontentdetectionofephedrinehydrochlorideinQingshenxiaopangpills.MethodsThesamplewasanalyzedonaWatersXTerraC18(4.6mm×250mm,5μm)columnusing1%H3PO4（0.4%triethylamine）acetonirile(91∶9)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwasat207nm.ResultsTheaveragerecoveryofthemethodwas98.4%withRSD1.2%.Thelinearrangeofphedrinehydrochloridewas16.6~166μg/mL.ConclusionThismethodissimple,quick,reproducibleandsuitableforthequalitycontrolofQingshenxiaopangpills.

Keywords:Qingshenxiaopangpills;ephedrinehydrochloride;RPHPLC

輕身消胖丸為中藥復方制劑，由羅布麻葉、麻黃、山楂等19味藥材研制而成。通過益氣、降脂綜合調(diào)整機體功能而達到減肥目的，使機體新陳代謝恢復正常平衡狀態(tài)，輕松減肥。為了較全面控制制劑質(zhì)量，本文以方中佐藥麻黃中的麻黃堿為定量指標。因本品藥味多，成分復雜，干擾嚴重，若按文獻報道的HPLC方法［1～3］，提取和測定鹽酸麻黃堿成分不理想。對樣品處理方法考察，經(jīng)色譜條件優(yōu)化，本實驗建立HPLC法測定了該制劑中鹽酸麻黃堿。該方法專屬性強，靈敏度高，重復性好，可作為本品質(zhì)量控制指標。

1儀器與試藥

Waters2695/2996，PDA二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站；鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241-200404）購自中國藥品生物制品檢定所；輕身消胖丸(廣州王老吉藥業(yè)有限公司,批號:20061206,20061210,20061212)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：WatersXTerraC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；1%磷酸溶液(含0.4%三乙胺)乙腈(體積比91∶9)；流速：1.0mL/min；檢測波長：207nm；柱溫：35℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，加水制成含鹽酸麻黃堿0.3320mg/mL。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取本品10g，加水60mL使溶解，加氨水7.5mL，搖勻，用三氯甲烷充分振搖萃取5次，每次20mL，合并三氯甲烷液置于圓底燒瓶中，室溫減壓旋轉至干［4］，加流動相溶解并定容至10mL，密塞，超聲使其溶解，0.45μm濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性樣品溶液除不含麻黃外，其余按處方比例制備缺麻黃的樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.2.4藥材對照液取麻黃藥材按“2.2.2”項下方法制備，作為藥材對照液。

2.3線性關系精密稱取鹽酸麻黃堿16.60mg，至50mL量瓶中，加流動相溶解至刻度，搖勻，得約0.3320mg/mL鹽酸麻黃堿對照品儲備液。精密吸取上述對照品儲備液1、2、4、6、8、10mL分別置20mL量瓶中，并用流動相稀釋至刻度，混勻后，分別進樣10μL，記錄色譜圖。以色譜峰面積(A)為縱坐標，對照品質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為A=21523ρ+21310，r=0.9997，鹽酸麻黃堿在166～166μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性。

2.4陰性試驗按上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、藥材對照液和陰性樣品溶液各20μL，分別注入高效液相色譜儀，結果供試品色譜中，鹽酸麻黃堿與其他色譜峰分離較好，陰性樣品溶液在鹽酸麻黃堿的保留時間范圍內(nèi)無干擾峰出現(xiàn)，而麻黃藥材和輕身消胖丸樣品中均含有鹽酸麻黃堿峰，說明鹽酸麻黃堿來源于麻黃藥材中。見圖1。

A.鹽酸麻黃堿對照品;B.麻黃陰性空白;C.輕身消胖丸供試品;D.麻黃藥材

圖1輕身消胖丸的HPLC色譜圖（略）

Fig.1ChromatogramsofQingshenxiaopangpills

2.5精密度試驗取供試品(批號20061212）溶液，重復進樣6次，每次20μL，測定峰面積值分別為1451487、1443701、1440687、1468314、1468913，1454920,結果RSD為0.83%。

2.6重復性試驗取同一批樣品（批號20061206），按“2.2.2”項下方法配制6份供試品溶液，分別測定鹽酸麻黃堿含量，結果平均含量為33.92mg/g，其RSD為10%。

2.7穩(wěn)定性試驗取同一供試品（批號20061206)溶液分別于0、2、4、6、8、12、24h進樣，分別測定麻黃堿的峰面積，結果其RSD為15%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率試驗精密稱取10g已知鹽酸麻黃堿含量（33.88mg/g)的同一批樣品6份，精密加入一定量鹽酸麻黃堿對照品，按“2.2.2”項下方法制備，測定其含量，并計算回收率，測定結果見表1。

2.9含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀,以上述色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算樣品的含量。共測定3批樣品,結果3個批號20061206、20061210、20061212的樣品所測得的鹽酸麻黃堿含量分別為33.88、33.62、34.17μg/g。

表1鹽酸麻黃堿的加樣回收率試驗結果（略）

Tab.1Resultsofrecovery(n=6)

3討論

3.1檢測波長的選擇取鹽酸麻黃堿對照品適量，加流動相溶解后，經(jīng)200～400nm紫外掃描，結果表明在207nm處有最大吸收，故選擇207nm作為檢測波長。

3.2流動相的選擇由于鹽酸麻黃堿的堿性基團極易受C18柱的硅膠鍵合相表面殘留的硅醇基極性點的影響，而使峰拖尾。在流動相中加入0.4%三乙胺作掃尾劑，起到抑制和掩蔽固定相表面極性點的作用，使峰形尖銳且對稱。

3.3色譜柱的選擇實驗中發(fā)現(xiàn)色譜柱對鹽酸麻黃堿的分離起決定性作用，分別考察了HypersilODSC18(4.0mm×250mm，5μm)色譜柱，WatersSymmetryC18(4.6mm×150mm，5μm)色譜柱，WatersXTerraC18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱。結果WatersXTerraC18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱使用的pH范圍寬，對鹽酸麻黃堿具有柱效高，峰形優(yōu)異，穩(wěn)定性好的優(yōu)點。

3.4提取方法的選擇本文曾采用直接加1%鹽酸甲醇超聲處理的方法制備樣品溶液［5］，但在鹽酸麻黃堿峰前后，有干擾峰，不易與鹽酸麻黃堿分離。利用麻黃堿能溶于水，加堿后游離的麻黃堿能被三氯甲烷、乙醚等有機溶劑萃取,加酸后成鹽復溶于水［4］，樣品經(jīng)堿化萃取后，除去了干擾峰。將輕身消胖丸加水溶解并堿化后，分別用三氯甲烷萃取，三氯甲烷液在下層，處理較方便。對加氨水的量也進行了比較，加7.5mL氨水，藥液pH值已達12，符合堿化的要求。對萃取次數(shù)比較的結果顯示萃取5次已經(jīng)提取完全。

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