舒肝保健茶齊墩果酸含量測定

前言：本站為你精心整理了舒肝保健茶齊墩果酸含量測定范文，希望能為你的創作提供參考價值，我們的客服老師可以幫助你提供個性化的參考范文，歡迎咨詢。

【摘要】目的建立舒肝保健茶中齊墩果酸的含量測定方法。方法采用RPHPLC法，以WaterssymmetryshieldC18柱（3.9mm×150mm，5μm）為色譜柱，乙腈水（體積比71∶29）為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為220nm，柱溫25℃。結果在0.0790～1.264μg范圍內，齊墩果酸的進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為96.5%，RSD為1.0%（n=6）。結論本法靈敏、簡便、重現性好,結果準確、可靠，可用于舒肝保健茶的質量控制。

【關鍵詞】反相高效液相色譜法；舒肝保健茶；齊墩果酸

舒肝保健茶是由天津中醫藥大學中醫藥研究院制劑中心新研發的一種復方保健品，主要由藏茵陳、梔子、淡竹葉、甘草等成分組成，具有清熱解毒、舒肝利膽的作用，可用于預防肝炎，主要用于病毒性肝炎、脂肪肝、消化不良的防御和治療。藏茵陳是此方中的君藥，其主要有效成分是齊墩果酸。文獻報道齊墩果酸已成為有效的抗肝炎的單體成分，具有保肝、解肝毒的作用［1］。本文建立了舒肝保健茶中主要藥效活性成分齊墩果酸的HPLC含量測定方法，結果令人滿意。

1儀器與試藥

Waters2695液相色譜系統：四單元數碼梯度泵、在線真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、Waters2487DAD檢測器、Empower工作站；METTLERTOLEDOAX205（瑞士）十萬分之一天平；BP121S萬分之一天平（瑞士沙脫利斯公司）。

舒肝保健茶（批號：061211，061212，061213）由天津中醫藥大學中醫藥研究院制劑中心提供；齊墩果酸對照品（批號：110709-200304）購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純，水為高純水。其它試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，采用WaterssymmetryshieldC18柱（3.9mm×150mm，5μm），流動相為乙腈水（體積比71∶29），檢測波長為220nm，流速為1.0mL/min，采用25℃柱溫。理論塔板數按齊墩果酸色譜峰計算不低于4000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品適量，加80%（質量分數）乙腈制成0.1mg/mL的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取舒肝保健茶，研細，取約2g，精密稱定，加入水20mL溶解，再用乙醚萃取3次，每次20mL，分取乙醚層，合并，蒸干，用80%（質量分數）乙腈溶解，轉移至5mL容量瓶中定容至刻度,濾過，作為供試液。

2.4陰性對照溶液的制備

取處方量，以相同工藝制備缺藏茵陳陰性制劑，依“2.3”項下方法操作即得。

2.5專屬性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果為：齊墩果酸對照品和供試品色譜圖中齊墩果酸峰與其它組分峰基線分離，分離度大于1.5，保留時間為17.490min；陰性對照色譜圖中與齊墩果酸對照品以及供試品色譜圖中相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明其它組分對齊墩果酸的測定無干擾,見圖1。

2.6線性關系考察

精密稱取50℃減壓干燥至恒重的齊墩果酸對照品6.32mg，置50mL容量瓶中，加80%（質量分數）乙腈溶解并定容至刻度，搖勻（質量濃度為126.4μg/mL），分別用80%（質量分數）乙腈配成濃度為126.4、63.2、31.6、15.8、7.90μg/mL的對照品溶液，各取10μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積（A）為縱坐標，對照品濃度（ρ）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：A=1754.3(ρ)+1355；r=0.9999，齊墩果酸在0.0790～1.264μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.7精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液，連續進樣6次，測定齊墩果酸峰面積值，RSD為1.7%（n=6），表明精密度良好。

圖1HPLC色譜圖（略）

A.對照品;B.樣品;C.陰性對照（缺藏茵陳）

Fig.1HPLCChromatograms（Acontrolstandard;BSample;CNegativesample）

2.8穩定性試驗

按“2.3”項下操作制備一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h測定齊墩果酸峰面積，RSD為0.35%，結果顯示供試品溶液在12h內穩定。

2.9重復性試驗

取同一批號供試品（批號：061211）6份，各約2g，精密稱定，分別按“2.3”項下操作制備供試品溶液，測定，得平均質量分數為147.9μg/g，RSD為1.4%（n=6），表明該方法的重復性較好。

2.10加樣回收率試驗

取本品（批號：061211，質量分數：147.9μg/mL）9份，各約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加質量濃度為126.4μg/mL的齊墩果酸對照品溶液適量，揮干，加入水20mL溶解，再用乙醚萃取3次，每次20mL，分取乙醚層，合并，蒸干，用80%(質量分數）乙腈溶解，轉移至5mL容量瓶中定容至刻度，濾過，測定每份的含量，計算回收率，平均回收率為96.5%，RSD為1.0%（n=9），結果見表1。

表1加樣回收率試驗結果（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest

2.11樣品含量測定

分別按“2.3”項下操作，制備不同批號（061211，061212，061213）的供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件下進行測定。測定結果見表2。

表2樣品含量測定結果（略）

Tab.2Analyticalresultsofsample

3討論

3.1供試品處理方法的選擇

在供試品的處理過程中，首先采取的是用甲醇直接超聲提取的方法，但在用80%(質量分數）乙腈復溶時，溶液出現了分層現象，原因可能是提取物中含有的蔗糖溶于水相而形成分層；于是再采取水溶解-有機溶劑萃取的方法處理，選擇了乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷3種溶劑進行考察，結果發現乙醚的效果最好，且乙醚的沸點低，回收簡便，故選用乙醚處理［2］。處理過程中對于乙醚的萃取次數也做了考察，結果顯示乙醚萃取3次，每次20mL效果最好。最終確定了水溶解乙醚萃取的處理方法。

3.2流動相的選擇

由于齊墩果酸極性較小，曾以甲醇水（體積比90∶10）為流動相進行考察［3］，結果樣品中齊墩果酸分離效果不理想，于是改為以乙腈水為流動相［4］，分離效果要好于甲醇水，并最終確定在乙腈水（體積比71∶29）的條件下，齊墩果酸峰形較好，在樣品中能達到完全分離，陰性樣品中無干擾。

【參考文獻】

［1］杜瑜,李煥德．齊墩果酸的研究進展［J］.中國藥房,2006，17(4):304-306.

［2］段雪云,許臘英,毛維倫,等．HPLC測定烏梅飲片中熊果酸和齊墩果酸的含量［J］.中成藥,2006,28(7):982-984.

［3］房霞,彭向前．HPLC法測定通脈活絡康顆粒中齊墩果酸含量［J］.中國藥品標準,2006,7(6):43-45.

［4］李琴韻,張雷.HPLC測定左歸顆粒中熊果酸和齊墩果酸含量［J］.中國中藥雜志,2005,30(4):308-309