清肺口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

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【摘要】目的建立清肺口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別制劑中葶藶子、黃芩和虎杖；采用高效液相色譜方法測(cè)定鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果薄層鑒別能檢出葶藶子、黃芩和虎杖的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰。鹽酸麻黃堿在16.41～525.0μg/mL之間與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=1.000,平均加樣回收率為99.89%，RSD為1.42%。結(jié)論該方法可用于清肺口服液的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】清肺口服液；鹽酸麻黃堿；薄層色譜法；高效液相色譜法

Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardofQingfeioralliquor.MethodsThequalityofDescurainiasophia,ScutellariabaicalensisGeorgiandPolygonumcuspidatumwasidentifiedbyTLC.ThecontentofephedrinehydrochloridewasdeterminedbyHPLC.ResultsThespotsonTLCplateswereclearwithoutinterferenceintheblankcontrol.Thelinerrangeofephedrinehydrochloridewas1641~525.0μg/mL(r=1.000).Theaveragerecoveryofephedrinehydrochloridewas99.89%andRSD1.42%.ConclusionThemethodcanbeusedforthequalitycontrolofQingfeioralliquor.

Keywords:Qingfeioralliquor;ephedrinehydrochloride;thinlayerchromatography;HPLC

清肺口服液由麻黃、葶藶子、黃芩、虎杖等中藥精制而成，具有宣肺開閉、清熱解毒、化痰止咳之功效，主治小兒病毒性肺炎痰熱閉肺證。麻黃為君藥，主要含有麻黃堿、偽麻黃堿等生物堿類成分［1］，其中麻黃堿含量較高，且為活性成分。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文建立了制劑中葶藶子、黃芩和虎杖的薄層鑒別方法及麻黃堿的HPLC含量測(cè)定方法。

1儀器與試劑

美國(guó)Waters515泵，Waters2487紫外可見檢測(cè)器，Rheodyne進(jìn)樣器，中科院大連化學(xué)物理所WDL95色譜工作站；PBQI型薄層自動(dòng)涂布器；薄層層析顯色加熱器；硅膠G（青島海洋化工集團(tuán)）；乙醇、甲醇為色譜純（美國(guó)Tedia公司）；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171241200303，HPLC法檢查純度大于99%）、黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)110715200212）、大黃素對(duì)照品（批號(hào)0757200206）、黃芩對(duì)照藥材（批號(hào)120955200406）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。葶藶子藥材經(jīng)江蘇省藥檢所鑒定為十字花科植物獨(dú)行菜（Lepidiumapetalum）的干燥成熟種子，習(xí)稱“北葶藶子”；并標(biāo)化后作為對(duì)照藥材使用。清肺口服液(南京中醫(yī)藥大學(xué)研制，批號(hào)：050914，050915，050916)。

2薄層鑒別

2.1黃芩［2］取清肺口服液1mL，加甲醇2mL，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。取缺黃芩陰性制劑1mL,同法制成缺黃芩的陰性制劑溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，用甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取黃芩對(duì)照藥材1g，加甲醇20mL，超聲處理20min,濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芤?mL使溶解，即得，作為黃芩對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水(體積比5∶3∶1∶1)為展開劑，預(yù)平衡30min，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗綠色斑點(diǎn)；缺黃芩的陰性制劑無(wú)干擾。見圖1。

1.缺黃芩的陰性制劑;2.黃芩對(duì)照藥材;3.黃芩苷對(duì)照品;4-6.清肺口服液

圖1清肺口服液黃芩薄層色譜圖（略）

Fig.1TLCchromatogramofScutellariabaicalensisGeorgi

2.2虎杖［3］取清肺口服液10mL，加2.5mol/L硫酸溶液10mL，水浴加熱30min，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次5mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含各1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）甲酸乙酯甲酸(體積比15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。見圖2。

1.虎杖對(duì)照藥材;2.大黃素對(duì)照品;3.大黃素甲醚對(duì)照品;4-6.清肺口服液

圖2清肺口服液虎杖薄層色譜圖（略）

Fig.2TLCchromatogramofPolygonumcuspidatum

2.3葶藶子［4］取清肺口服液10mL，置分液漏斗中，加水飽和正丁醇10mL振搖提取，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺葶藶子陰性制劑1mL,同法制成缺葶藶子的陰性制劑溶液。再取北葶藶子對(duì)照藥材粉末1g，加甲醇10mL，密塞，浸泡24h，超聲處理20min，濾過，濾液作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以水飽和正丁醇冰醋酸水(體積比9∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。缺葶藶子的陰性制劑無(wú)干擾，見圖3。

1.缺葶藶子的陰性制劑;2.葶藶子對(duì)照藥材;3-5.清肺口服液

圖3清肺口服液葶藶子薄層色譜圖（略）

Fig.3TLCchromatogramofDescurainiasophia

3含量測(cè)定

3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取于五氧化二磷干燥器中干燥6h的鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成每1mL含01mg的溶液，即得。

3.2供試品溶液的制備取清肺口服液5mL，置分液漏斗中，加5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）氨水10mL，搖勻，用三氯甲烷振搖提取4次（10×2，5×2mL）合并三氯甲烷液，用5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）氨水5mL洗滌以去除雜質(zhì)，水層用三氯甲烷5mL振搖提取1次，合并三氯甲烷液，用0.05mol/L鹽酸溶液振搖提取3次（10，5，5mL），提取液置25mL量瓶中，用10%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）氫氧化鈉溶液調(diào)pH至4，加水稀釋至刻度，即得。

3.3色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈水三乙胺磷酸（體積比5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于3000。

3.4線性關(guān)系考察精密稱取于60℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對(duì)照品10.50mg，置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，制成鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1.050mg/mL）。分別配成525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41μg/mL的系列對(duì)照品溶液，分別吸取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝2.098×104ρ-27840.877，r＝1.0000。表明鹽酸麻黃堿在16.41～525.0μg/mL之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5空白試驗(yàn)原方去除麻黃藥材，按制劑工藝制備缺麻黃的陰性制劑。取陰性制劑5mL，置分液漏斗中，按含量測(cè)定方法分析，空白樣品色譜在鹽酸麻黃堿相應(yīng)保留時(shí)間上沒有干擾峰。見圖4。

A.缺麻黃的陰性制劑;B.鹽酸麻黃堿對(duì)照品;C.清肺口服液1.鹽酸麻黃堿

圖4HPLC色譜圖（略）

Fig.4HPLCchromatogram

3.6穩(wěn)定性考察取同一批號(hào)（050914）制劑，每隔2h進(jìn)樣1次，共測(cè)6次，結(jié)果峰面積RSD=0.67%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（050914）制劑5份，分別按照供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，鹽酸麻黃堿的平均含量為0.4261mg/mL,RSD=1.93％。

3.8加樣回收率試驗(yàn)取已知鹽酸麻黃堿含量的制劑樣品(批號(hào)：050914，含量:0.4261mg/mL)，進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)。取本品2.5mL，共6份，分別加入1.050mg/mL鹽酸麻黃堿對(duì)照液0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2mL置分液漏斗中，按“3.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，并計(jì)算鹽酸麻黃堿回收率為99.54％，RSD=2.90％，結(jié)果見表1。

表1鹽酸麻黃堿回收率試驗(yàn)（略）

Tab.1Recoverytestofephedrinehydrochloride

3.9制劑樣品測(cè)定3批制劑樣品，如法測(cè)定，根據(jù)外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表2。

表2鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.2Contentofephedrinehydrochlorideinthesample

4討論

4.1由于測(cè)定波長(zhǎng)處于末端吸收附近，以乙腈水系統(tǒng)為流動(dòng)相，基線噪音較小，但由于麻黃堿為生物堿成分，需加入緩沖體系進(jìn)行色譜分析，經(jīng)試驗(yàn)研究表明，在乙腈水三乙胺磷酸（體積比5∶95∶0.05∶0.1）(pH3)的條件下，可使鹽酸麻黃堿呈現(xiàn)良好分離。故選乙腈水三乙胺磷酸（體積比5∶95∶0.05∶0.1）為流動(dòng)相。

4.2麻黃堿為清肺口服液的活性成分，可用來(lái)作為中成藥的定量指標(biāo)成分。

4.3該方法簡(jiǎn)便可靠，精密度高，分離度好，可用于清肺口服液的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。

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