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      陳皮總黃酮提取工藝

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      陳皮總黃酮提取工藝

      【摘要】目的優化新會陳皮黃酮提取工藝條件。方法在單因素試驗的基礎上,以總黃酮含量為指標,采用正交試驗方法考察液固比、乙醇濃度、提取時間等因素。結果各因素的影響次序是液固比>提取溫度>提取時間;最佳提取工藝為:乙醇體積分數為60%,液固比1∶25,提取溫度70℃,提取時間3h,提取1次。結論優選得到的工藝穩定可行。

      【關鍵詞】新會陳皮;總黃酮;正交設計

      OptimizationofextractionprocessoftotalflavonoidsinXinhuidryorangepeelbyorthogonaldesign

      LINLin,LINZi-xia,HUANGQing-hua

      (SectionofAnalyticalChemistry,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou,Guangdong510006,China)

      Abstract:ObjectiveTooptimizeextractionprocessconditionfortotalflavonoidsinXinhuidryorangepeel.MethodsOnthebasisofthesingleexperimentalfactor,theoptimizedextractionconditiononthebasisoftotalflavonoidsweredeterminedbyorthogonaldesign.ResultsTheorderoffactorswhichaffectedthetotalflavonoids’extractionwas:solventquantity>extractiontemperature>extractionduration;Theoptimumextractionconditionsareextractiononcewith60%ethanol,solventratio1∶25at70℃for3hoursinwaterbath.ConclusionThemethodissimple,convenient,andaccurate.

      Keywords:XinHuidryorangepeel;totalflavonoids;orthogonaldesign

      陳皮是蕓香科植物橘CitusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮,藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”。“廣陳皮”為茶枝柑Citusreticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮,主產于廣東新會,是廣東十大道地藥材之一。據報道陳皮的有效成分為黃酮類化合物和揮發油,具有抗衰老、軟化心血管、減輕實驗動物的動脈粥樣硬化等功效[1-4]。影響陳皮總黃酮提取的因素很多,本文選擇乙醇體積分數,提取溫度,提取時間,液固比和提取次數進行單因素試驗,在此基礎上采用正交試驗,優選得到新會陳皮總黃酮提取的最佳工藝。

      1材料與儀器

      TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司),旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠),恒溫水浴鍋,索氏抽提器等。

      樣品由新會陳皮協會提供,并由廣東藥學院中藥鑒定教研室李書淵教授鑒定為茶枝柑CitusReticulataChachi的干燥成熟果皮。樣品粉碎成粗粉,置干燥箱于60℃烘12h以上。于閉光、陰涼處存放。橙皮苷(購自中國藥品生物制品檢定所,批號110712-200512),其他試劑為分析純。

      2方法與結果

      2.1陳皮總黃酮的提取

      稱取約5g陳皮粗粉置250mL燒瓶中,加入石油醚(30~60℃)80mL,60℃回流脫脂2h;揮干石油醚后,根據實驗要求,按照不同的水提取溫度、提取時間以不同液固比及提取次數進行提取,抽濾,洗滌濾渣,合并濾液和洗液,濃縮去適量的乙醇,然后轉入100mL量瓶中,定容,搖勻,即為供試品溶液。

      2.2橙皮苷標準曲線的繪制

      取0.2274mg/mL的橙皮苷對照品貯備液,精密吸取0.5、1、1.5、2.0和2.5mL置25mL量瓶中,加體積分數為60%的乙醇至刻度。在285nm處測定吸收度,并繪制標準曲線。結果表明:在4.548~22.74μg/mL范圍內有良好的線性關系,回歸方程為A=0.033C+0.013,r=0.9993。

      2.3測定方法

      取一定提取條件下所得的供試品溶液,適當稀釋,在285nm處測定樣品的吸光度。根據標準曲線計算總黃酮的含量。以陳皮總黃酮的得率(%)為指標,確定最佳提取條件。

      2.4單因素試驗

      選取水浴溫度、乙醇體積分數、提取時間、液固比、提取次數這5個可能影響提取效果的因素做單因素試驗,以確定相關因素對陳皮提取物中黃酮含量的影響,結果見圖1。

      A.提取溫度;B.乙醇體積;C.提取時間;D.液固比;E.提取次數

      由圖1可以得出:在70℃時陳皮總黃酮得率達到最大,故可以確定最佳的提取溫度為70℃;乙醇體積分數大于60%,陳皮總黃酮得率逐漸減少,故可以確定最佳的乙醇體積分數為60%;提取時間從2h后得率增長不大,以5h為最高;液固比在30倍后有顯著減少,以25倍為最高;提取1次后得率增長不大,從節省成本和節省溶劑的角度,提取次數為1次。

      2.5正交試驗設計優選最佳提取條件

      通過單因素實驗選取影響較大的三個因素:提取時間、提取溫度和液固比,運用正交設計實驗法,選用三因素三水平來確定陳皮總黃酮提取的最佳條件。實驗結果見表1~3。

      表1實驗因素水平表(略)

      Tab.1Factorsandlevels

      從表2的直觀分析可以看出,3個因素對總黃酮提取含量的影響次序:液固比、提取溫度、提取時間。

      從表3的方差分析可以看出,液固比和提取溫度對結果有顯著性影響,提取時間對結果的影響不顯著,從經濟、省時的原則考慮,提取時間定為3h。綜合上面的因素,最佳提取工藝:體積分數為60%的乙醇,提取溫度70℃,液固比1∶25,提取時間3h,提取1次。

      表2L9(34)正交實驗結果與直觀分析(略)

      Tab.2ResultofL9(34)orthogonalexperimentandanalysis

      表3L9(34)正交實驗方差分析表(略)

      Tab.3ANOVAanalysisofL9(34)orthogonalexperiment

      2.6驗證實驗

      按上述優化提取條件平行做3份樣品,結果穩定,證明該方案可行。

      3討論

      3.1測定陳皮中總黃酮時,文獻大多采用蘆丁為對照品和“NaNO2-AlNO3-NaOH”體系,使得吸收峰向高處移動,以減少干擾[5-6]。但實際上陳皮總黃酮基本不含蘆丁,絡合后蘆丁最大的吸收峰和陳皮總黃酮的吸收峰相差較大。本文用陳皮總黃酮的主要成分橙皮苷為標準品,直接測定。實驗結果顯示兩者的最大吸收波長很接近。該方法簡單,易操作,技術成熟,重現性好。

      3.2陳皮總黃酮主要為黃酮苷類,用乙醇提取較水提好,得率高,雜質少,有利于后續的分離,溶劑可回收,適于工業生產。

      【參考文獻】

      [1]王姝梅,何春蘭.陳皮提取物清除氧自由基和抗脂質過氧化作用[J].中國藥科大學學報,1998,29(6):462~465.

      [2]蘇丹,秦德安.陳皮提取液抗氧化及延緩衰老作用研究[J].華東師范大學學報:自然科學版,1999(1):100~102.

      [3]李琴山,婁桂予,錢民章,等.橙皮苷與蘆丁體外抗高密度脂蛋白氧化修飾的作用[J].中西醫結合學報,2004,3(2):115~120.

      [4]趙國華,陳宗道.柑桔類黃酮生物活性的研究進展[J].食品與發酵工業,2001,27(3):71~75.

      [5]房方,張廣強,謝新年.用分光光度法進行黃酮類化合物含量測定的研究[J].河南中醫藥學刊,1997,12(1):17~19.

      [6]顏仁梁,劉志剛.中草藥、中藥制劑中總黃酮類化合物含量測定方法綜述[J].廣州醫藥,2005,36(6):6~10.

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