新會(huì)陳皮總黃酮提取工藝

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摘要：目的優(yōu)化新會(huì)陳皮總黃酮提取的工藝條件。方法在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以總黃酮含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)方法考察液固比、乙醇濃度、提取時(shí)間等因素。結(jié)果各因素的影響次序是液固比＞提取溫度＞提取時(shí)間；最佳提取工藝為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，液固比1∶25，提取溫度70℃，提取時(shí)間3h，提取1次。結(jié)論優(yōu)選得到的工藝穩(wěn)定可行。

關(guān)鍵詞：新會(huì)陳皮;總黃酮;正交設(shè)計(jì)

OptimizationofextractionprocessoftotalflavonoidsinXinhuidryorangepeelbyorthogonaldesign

LINLin,LINZi-xia,HUANGQing-hua

(SectionofAnalyticalChemistry,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou,Guangdong510006,China）

Abstract:ObjectiveTooptimizeextractionprocessconditionfortotalflavonoidsinXinhuidryorangepeel.MethodsOnthebasisofthesingleexperimentalfactor,theoptimizedextractionconditiononthebasisoftotalflavonoidsweredeterminedbyorthogonaldesign.ResultsTheorderoffactorswhichaffectedthetotalflavonoids’extractionwas:solventquantity＞extractiontemperature＞extractionduration;Theoptimumextractionconditionsareextractiononcewith60%ethanol,solventratio1∶25at70℃for3hoursinwaterbath.ConclusionThemethodissimple，convenient,andaccurate.

Keywords:XinHuidryorangepeel;totalflavonoids;orthogonaldesign

陳皮是蕓香科植物橘CitusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”?！皬V陳皮”為茶枝柑Citusreticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮，主產(chǎn)于廣東新會(huì)，是廣東十大道地藥材之一。據(jù)報(bào)道陳皮的有效成分為黃酮類化合物和揮發(fā)油，具有抗衰老、軟化心血管、減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的動(dòng)脈粥樣硬化等功效［1-4］。影響陳皮總黃酮提取的因素很多，本文選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)，提取溫度，提取時(shí)間，液固比和提取次數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)，優(yōu)選得到新會(huì)陳皮總黃酮提取的最佳工藝。

1材料與儀器

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)，恒溫水浴鍋，索氏抽提器等。

樣品由新會(huì)陳皮協(xié)會(huì)提供，并由廣東藥學(xué)院中藥鑒定教研室李書淵教授鑒定為茶枝柑CitusReticulataChachi的干燥成熟果皮。樣品粉碎成粗粉，置干燥箱于60℃烘12h以上。于閉光、陰涼處存放。橙皮苷（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110712-200512），其他試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1陳皮總黃酮的提取

稱取約5g陳皮粗粉置250mL燒瓶中，加入石油醚(30～60℃)80mL，60℃回流脫脂2h；揮干石油醚后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，按照不同的水提取溫度、提取時(shí)間以不同液固比及提取次數(shù)進(jìn)行提取，抽濾，洗滌濾渣，合并濾液和洗液，濃縮去適量的乙醇，然后轉(zhuǎn)入100mL量瓶中，定容，搖勻，即為供試品溶液。

2.2橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取0.2274mg/mL的橙皮苷對(duì)照品貯備液，精密吸取0.5、1、1.5、2.0和2.5mL置25mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇至刻度。在285nm處測(cè)定吸收度,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：在4.548～22.74μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=0.033C+0.013，r=0.9993。

2.3測(cè)定方法

取一定提取條件下所得的供試品溶液，適當(dāng)稀釋，在285nm處測(cè)定樣品的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮的含量。以陳皮總黃酮的得率(％)為指標(biāo)，確定最佳提取條件。

2.4單因素試驗(yàn)

選取水浴溫度、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、液固比、提取次數(shù)這5個(gè)可能影響提取效果的因素做單因素試驗(yàn)，以確定相關(guān)因素對(duì)陳皮提取物中黃酮含量的影響，結(jié)果見圖1。

A.提取溫度;B.乙醇體積;C.提取時(shí)間;D.液固比;E.提取次數(shù)圖15種因素對(duì)陳皮總黃酮得率的影響（略）

Fig.1Effectoffivefactorsontheyieldoftotalflavonoids

由圖1可以得出：在70℃時(shí)陳皮總黃酮得率達(dá)到最大，故可以確定最佳的提取溫度為70℃;乙醇體積分?jǐn)?shù)大于60％，陳皮總黃酮得率逐漸減少，故可以確定最佳的乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％;提取時(shí)間從2h后得率增長(zhǎng)不大，以5h為最高;液固比在30倍后有顯著減少，以25倍為最高;提取1次后得率增長(zhǎng)不大，從節(jié)省成本和節(jié)省溶劑的角度，提取次數(shù)為1次。

2.5正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳提取條件

通過單因素實(shí)驗(yàn)選取影響較大的三個(gè)因素：提取時(shí)間、提取溫度和液固比，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法，選用三因素三水平來確定陳皮總黃酮提取的最佳條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1～3。

表1實(shí)驗(yàn)因素水平表（略）

Tab.1Factorsandlevels

從表2的直觀分析可以看出，3個(gè)因素對(duì)總黃酮提取含量的影響次序：液固比、提取溫度、提取時(shí)間。

從表3的方差分析可以看出，液固比和提取溫度對(duì)結(jié)果有顯著性影響，提取時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響不顯著，從經(jīng)濟(jì)、省時(shí)的原則考慮，提取時(shí)間定為3h。綜合上面的因素，最佳提取工藝：體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇，提取溫度70℃，液固比1∶25，提取時(shí)間3h，提取1次。

表2L9(34)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與直觀分析（略）

Tab.2ResultofL9(34)orthogonalexperimentandanalysis

表3L9(34)正交實(shí)驗(yàn)方差分析表（略）

Tab.3ANOVAanalysisofL9(34)orthogonalexperiment

2.6驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按上述優(yōu)化提取條件平行做3份樣品，結(jié)果穩(wěn)定，證明該方案可行。

3討論

3.1測(cè)定陳皮中總黃酮時(shí)，文獻(xiàn)大多采用蘆丁為對(duì)照品和“NaNO2-AlNO3-NaOH”體系，使得吸收峰向高處移動(dòng)，以減少干擾［5-6］。但實(shí)際上陳皮總黃酮基本不含蘆丁，絡(luò)合后蘆丁最大的吸收峰和陳皮總黃酮的吸收峰相差較大。本文用陳皮總黃酮的主要成分橙皮苷為標(biāo)準(zhǔn)品，直接測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩者的最大吸收波長(zhǎng)很接近。該方法簡(jiǎn)單，易操作，技術(shù)成熟，重現(xiàn)性好。

3.2陳皮總黃酮主要為黃酮苷類，用乙醇提取較水提好，得率高，雜質(zhì)少，有利于后續(xù)的分離，溶劑可回收，適于工業(yè)生產(chǎn)。

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