無機陽離子對全蝎抗凝活性影響

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摘要：目的研究全蝎中無機陽離子對全蝎抗凝活性的影響。方法以凝血酶時間為指標，分別在全蝎提取液中加入相應不同濃度的無機陽離子，考察其對全蝎抗凝活性的影響。結果加入無機陽離子后，明顯縮短了全蝎的凝血酶時間（P＜0．01）。結論銨離子等無機陽離子對全蝎提取液抗凝活性有明顯的影響。

關鍵詞：全蝎；抗凝活性；凝血酶時間；無機陽離子

〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofinorganicionsinscorpinonanticoagulatingactionofscorpin．MethodsTakingthethrombintimeasthetargets，theinorganicionswithdifferentconcentrationwererespectivelymixedinthescorpinextractionandtheireffectsonanticoagulatingactionofscorpinweremeasured．ResultThethrombintimewasdistinctlyshortened（P＜0．01）aftertheionsjoiningintotheextraction．ConclusionTheionsareveryeffectivetotheanticoagulatingactionofthescorpinextraction．

〔Keywords〕scorpin;anticoagulatingactive;thrombintime;inorganicions

全蝎作為傳統的中藥材，具有熄風止痙、解毒散結、通絡止痛等功效。全蝎除了含蝎毒素、三甲胺、?；撬?、甜菜堿、膽甾醇、卵磷脂、甘油酯、棕櫚酸、硬脂酸、銨鹽17種氨基酸等，還含有Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb等元素［1，2］1415。實驗證明全蝎提取液具有明顯的抗凝、抗血栓及促纖溶作用［3，10］。為進一步研究全蝎抗凝活性的影響因素，本文探索了8種無機陽離子（NH4＋、Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋、Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋、Pb2＋）對全蝎抗凝活性的影響，為臨床應用提供依據。

1實驗材料

1．1儀器

Start－4半自動四通道血凝儀（法國s11AGO公司）；4300－Pro紫外分光光度計（瑞士安瑪西亞公司）；HR2838型勻漿機（菲利普公司）；移液槍。

1．2試藥

全蝎（購自老百姓大藥房），凝血酶（上海太陽生物技術有限公司），血漿（自制），生理鹽水；NH4Cl，NaCl，CuCl2，CaCl2，MgCl2，FeCl2，MnCl2，PbCl2，ZnCl2，無水乙醇，均為分析純。

2方法與結果

2．1供試品溶液的制備［3，10］

篩去塵渣，稱取全蝎50g，用8倍量的蒸餾水浸泡過夜，用勻漿機以10000r／min勻漿，然后煎煮3次（均為8倍量蒸餾水），每次30min，過濾，合并濾液，水浴濃縮至含生藥1g／mL，3000r／min離心20min，分別加無水乙醇至60％的濃度，4℃放置過夜，3000r／min離心20min，取上清液，水浴濃縮至含生藥1g／mL溶液，3000r／min離心20min，取上清液于4℃低溫冰箱中保存備用。

2．2凝血酶時間的測定方法［4，5］

先取凝血酶用生理鹽水稀釋至一定的倍數，然后取待測血漿（參比血漿）0．1mL，37℃保持2min，加入37℃預溫凝血酶0．1mL搖勻，立即開始測定，記錄凝固時間，調節凝血酶時間，使空白時間在20～22s。

2．3NH4＋Cl對全蝎抗凝活性的影響

分別取NH4Cl供試液，加至NH4＋的濃度為0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140、0．420、0．700、0．900、1．125、1．540μmol／mL中。加入血漿，全蝎提取液0．1mL，凝血酶0．1mL，測凝血時間。每個濃度重復測5次。結果如表1。通過對照在全蝎提取液中加入NH4Cl前后的凝血時間表明，明顯縮短了全蝎提取液的抗凝時間（P＜0．01）。2．4NH4＋影響全蝎抗凝活性的確認

由于用NH4Cl提供NH4＋，為了確定其中的Cl－對全蝎提取液的抗凝活性的是否產生影響，用0．01、0．14、1．54μmol／mL的NH4Cl、NaCl溶液，加入全蝎提取液中，按“2．3”項下方法加血漿、凝血酶，測凝血時間，每個濃度重復測5次，取平均值。結果發現NaCl溶液對全蝎提取液的抗凝活性無影響，NH4Cl明顯降低了其抗凝作用，縮短了凝血時間。這表明是NH4＋而不是Cl－對全蝎抗凝時間有影響（P＜0．01），降低了全蝎抗凝活性。如圖1。

2．5NH4＋自身抗凝作用測定

為了確定NH4＋本身是否對血漿有抗凝活性，加入NH4＋至0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140μmol／mL，用生理鹽水代替全蝎提取液，其余同方法“2．3”，測凝血時間。發現凝血時間還稍有增加，見表2。經過數理統計分析，NH4＋并無抗凝作用（P＞0．05）。

2．6其他無機元素對全蝎抗凝活性的影響

按“2．3－2．5”項下的方法，分別探討了加入Pb2＋，Mn2＋，Mg2＋，Cu2＋，Fe2＋，Zn2＋，Ca2＋至0．1，0．2，0．3，0．4，0．5μmol／mL后對全蝎抗凝活性的影響，通過測凝血時間，發現在我們的濃度范圍，凝血時間都明顯縮短了（P＜0．01），但不同無機陽離子縮短的程度稍有差別。結果如圖2。

3討論

 許多中藥材里的微量無機陽離子對藥材的藥性藥效有很大的影響。全蝎的主要活性成分是蛋白質、氨基酸等物質，其中蛋白質含量最高［6］，是主要活性物質。全蝎的抗凝作用與其中的蛋白質有關［3］11。在實驗中，所試驗的無機陽離子本身無抗凝作用（P＞0．05），雖然無機陽離子使凝血時間稍有增加（9s以內），有輕微的促凝性，但與加到全蝎提取液中縮短的凝血時間（117s以上）相比是很小的。不難看出，不是無機陽離子的輕微促凝作用抵消了全蝎提取液抗凝作用，而是這些無機陽離子加入到全蝎提取液中后與之發生作用使凝血時間縮短，明顯降低了其抗凝活性（P＜0．01）。

每克全蝎中含有微克級的Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb及銨離子等［1］1415，這些微量離子的存在可能影響了全蝎毒蛋白結構，從而影響全蝎的藥效作用。在實驗中，全蝎中加入微克級的這些離子后，全蝎的抗凝作用明顯降低了。不同來源的全蝎所含無機陽離子的量有所變化［1］［7］1414，實驗中加入微量元素的量在其變化范圍內，全蝎中含有的無機陽離子很可能會減低全蝎抗凝活性。在實際應用中盡量避免與這些無機陽離子混用，可提高全蝎的抗凝藥效。

【參考文獻】

［1］張繼平，姚暉，蔡麗云，等．鮮品炮制全蝎與市售全蝎藥材宏量和微量元素含量的比較研究．中成藥，2005（12）：1414－1416．

［2］王芳，金昌東，王振月，等．全蝎的微量元素分析．微量元素與健康研究，1995，12（4）：34－36．

［3］彭延古，雷田香，付東云，等．全蝎抗凝活性成分的定性分析．湖南中醫學院學報，2005，25（6）：10－11．

［4］彭延古，許光明，徐愛良，等．全蝎抗凝活性成分的研究．湖南中醫學院學報，2006，26（1）：16－17．

［5］郝曉元，彭延古，肖長江．全蝎提取液對血液凝固的影響．中國血栓與止血雜志，2001，7（4）：158－159．

［6］高廣生．全蝎不同炮制品中氨基酸含量分析．山東醫藥工業，2000，19（6）：17－18．

［7］周祖文．影響中藥微量元素的相關因素研究概況．微量元素與健康研究，2002，9（l）：66－68．