葛根素高效液相色譜
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提要：目的：測定葛粉中葛根素的含量。方法：用HPLC法測定，以MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，250nm為檢測波長。結果：葛根素呈良好的線性關系，平均回收率為98.6%,RSD為1.76%。結論：該法簡單、快速、準確。
關鍵詞：葛粉;葛根素;HPLC
Abstract:Object:DeterminationofPuerariainPuerariaPowderMethods:PuerariaweredeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）.Detectionwavelengthwasat250nm.Results:Puerariashowedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6%andRSDwas1.76%.Conclusion:Thismethodwassimple,quickandaccurate.
Keywords:PuerariaPowder;Pueraria;HPLC
葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉功效，用于外感發熱頭痛、項背強痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，高血壓頸項強痛等[1]。現代研究證實，葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。有關葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5]，但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進行比較研究,并采用高效液相色譜法對葛粉樣品進行了定量分析,結果令人滿意。
1實驗部分
1.1儀器與試劑
島津LC－10Atvp高效液相色譜儀；SPD－10Avp紫外檢測器；島津UV－265紫外分光光度儀，多功能榨汁機/攪拌機SG300－I（上海科駿電器有限公司）。甲醇（色譜純），水（二次蒸餾），其余均為分析純。葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；鮮葛（浙江省永嘉縣潘坑鄉）。
1.2色譜條件
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱C18diamonsil5ul(150×4.6mmI.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，紫外檢測波長250nm。
2結果與討論
2.1提取溶劑濃度的選擇
精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超聲提取60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結果表明30%乙醇提取最好。
2.2超聲提取時間的選擇
精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml，超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結果表明超聲60分鐘為最佳提取條件。
2.3流動相及流速的選擇
試驗時曾采用下述流動相進行測定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）為流動相，結果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）為流動相，樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。
2.4標樣溶液的制備
稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標準液。
2.5葛粉制備
取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機內，攪拌三次，每次1分鐘，每次加水200ml，150ml，100ml，合并漿汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉漿用定量濾紙過濾，低溫干燥，放入干燥器中備用。
2.6供試品溶液制備
精確稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。
2.7線性關系考察
在上述色譜條件下，分別進標樣溶液0.5、3、5、7、10μl，測得各峰面積。以葛根素為橫座標（A），以峰面積（Y）為縱座標，計算得回歸方程：Y=3.90×106x+728.14,相關系數r＝0.9999；結果紫外檢測葛根素在0.0065-0.13μg范圍內呈良好線性關系。
2.8精密度試驗
取上述標樣溶液，連續進樣5次，測定，RSD為1.11%。
2.9重復性試驗
取同一樣品重復測定5次，RSD為1.61%。
2.10穩定性試驗
取上述供試品溶液，0、2、5、7、10h進樣，RSD為2.1%，10小時內進樣穩定。
2.11回收率試驗
取已知含量的樣品，分別加入葛根素標樣，按上述方法測定5次，平均回收率為98.6%,RSD為1.76%。見表1。
2.12樣品分析
精密吸取標樣溶液5μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，結果:葛粉中葛根素的含量為0.06%（n=3），見下圖。
3討論
本文采用高效液相色譜法測定葛粉中葛根素的含量,方法簡單、快速、準確，結果滿意，可用于葛粉中葛根素的含量測定。
[參考文獻]
[1]中國藥典2005版一部.2005:233-234.
[2]章育中，楊凡。高效液相色譜法測定葛根及其片劑中異黃酮的含量.藥物分析雜志，1984,4(2):67.
[3]張蕾,潘揚，朱蓉貞，等。不同品種及產地的葛根中葛根素含量的比較。中國中藥雜志，1995,20(7):399.
[4]肖學鳳,高嵐。HPLC法測定不同產地葛根中葛根素的含量。中草藥，2001,32(3):220.
[5]遲霽菲,張國剛.高效液相色譜法測定不同產地葛根中葛根素的含量.中南藥學2006,l14(14):307-308
