百參口服液多糖含量測定

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【摘要】測定百參口服液中的多糖含量以及穩定性。方法采用苯酚-硫酸顯色法對多糖進行含量測定；對口服液做影響因素實驗，測定其在高溫、高溫和光照條件下的穩定性。用紫外分光光度計測定多糖的含量。結果多糖的線性范圍2～10μg/ml，相關系數r=0.9991，加樣回收率為98.59%，RSD為0.81%，初步穩定性實驗表明，口服液在高溫、高濕和光照條件下穩定。結論苯酚-硫酸顯色法測定百參口服液中的多糖，操作簡單，靈敏度高，多糖制劑質量穩定。

【關鍵詞】百參口服液多糖含量測定穩定性

【Abstract】ObjectiveTodetermineandstudyoncontentandstabilityofthepolysaccharideofbaishenoralliquid.MethodsThemethodofphenol-sulfuricwasusedtodeterminethepolysaccharidecontentandtheinfluencingfactorexperimentwasdonetodeterminethestabilityunderhightemperature,highhumiditylevelandilluminationcondition.ThecontentofpolysaccharidewasdeterminedbyUV-spectrophotometry.ResultsThelinearrangewas2～10μg/ml（r=0.9991）,theaveragerecoverywas98.59%withRSD=0.81%.Thepreliminarystabilityresearchindicatedthatbaishenoralliquidwasstableunderhightemperature,highhumiditylevelandilluminationcondition.ConclusionThemethodofphenol-sulfurictodeterminethepolysaccharidecontentissimpleandhighsensitivity.Thepreparationofpolysaccharidehasstablequality.

【Keywords】baishenoralliquid;polysaccharide;contentdetermination;stability

百參口服液是以百合、沙參、玉竹、山藥等藥材組成，具有抗衰老、提高免疫力的功效，用于提高生活質量，起主要作用的是其多糖成分，研究表明多糖具有免疫調節、抗腫瘤、抗衰老等多種藥理作用［1，2］。本文對百參口服液用苯酚-硫酸法［3］對有效成分多糖進行含量測定，方法簡便、準確、專屬性強，可用于百參口服液的質量控制。現報告如下。

1儀器與試藥

UV-1型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；FA2004電子分析天平（上海恒平科學儀器有限公司）；101-1型恒溫干燥箱（江蘇省金壇市大地儀器廠）；百參口服液（自制）；D-無水葡萄糖對照品，試劑均為分析純。

2方法與結果

2．1含量測定采用苯酚-硫酸法對百參口服液中的多糖進行含量測定，以葡萄糖作為標準品。

2．1．15%苯酚溶液的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g，碳酸氫鈉0.05g，蒸餾收182℃餾分，稱取此餾分10g，加蒸餾水190g，溶解，搖勻，置于棕色瓶中備用。

2．1．2葡萄糖對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，置于100ml容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，備用。

2．1．3供試品液的制備精密稱取干燥至恒重的粉末100ml置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。移取1.0ml樣品溶液置于50ml容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度搖勻，搖勻，備用。

2．1．4吸收波長的選擇精密吸取葡萄糖標準品溶液0.1ml，置于10ml具塞刻度試管中，精密加入5％苯酚溶液1.0ml,然后迅速精密加入濃硫酸5.0ml，搖勻，微振5min，定容，置于沸水浴中加熱15min，取出，置于冷水中冷卻30min，取出，定容。在紫外可見分光光度計上測定在440～512nm波長之間的吸光度。吸收結果見圖1。可見，在490nm處有最大吸收，故選擇在490nm波長處測定。

2．1．5標準曲線的繪制精密吸收葡萄糖標準溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置于50ml容量瓶中，加入蒸餾水并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各濃度溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度試管中，分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，搖勻，微振5min，定容。置于沸水浴中加熱15min，然后至冷水浴中冷卻30min，取出，定容。隨行空白。在490nm處測定吸光度A值。以葡萄糖用量（濃度）為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，見圖2。數據經回歸處理后，得回歸方程y=13.138x+0.0147，r=0.9991。由圖2可見，葡萄糖標準品在2～10μg/ml范圍內呈良好線性關系

2．1．6多糖含量的測定精密稱取樣品溶液0.5ml，按照“標準曲線的繪制”項下的方法測定吸光度值，計算葡萄糖的質量濃度，得出換算因子f。然后精密吸取供試品溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度試管中，按照“標準曲線的繪制”項下的方法，測定吸光度A值（平行測定3次）。按照公式：多糖含量=C×D×f／W×100％（C：樣品溶液的葡萄糖的質量；D：樣品溶液的稀釋倍數；f：換算因子；W：樣品的質量）經計算，求得供試品中多糖的質量分數為87.6％。

2．1．7精密度試驗精密吸取多糖供試品溶液2.0ml，按照“標準曲線的繪制”項下方法測定吸光度A值，平行測定6次，結果RSD=1.39％，表明用該方法測定樣品中多糖的含量精密度良好。

2．1．8穩定性試驗取供試品溶液適量，按照“供試品溶液的制備”及“標準曲線的繪制”項下的方法，測定吸光度A值，每隔1h測定1次，共測5次。RSD=1.03％，表明供試品4h內穩定。

2．1．9回收率試驗精密稱取多糖樣品6份，每份500mg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，分別加入葡萄糖標準品溶液1.5ml，加入蒸餾水至刻度，搖勻，制得供試品溶液，按照“標準曲線的繪制”項下的方法操作，測定吸光度A值。本實驗數據經公式（回收率=實驗測值-供試品所含被測成分量/加入葡萄糖的量）換算得出平均回收率為98.59%，RSD為0.81%。見表1。表1回收率測定結果

2．2百參口服液穩定性的研究對藥物制劑的基本要求應該是安全、有效、穩定。藥物制劑穩定性對保證制劑安全有效是非常重要的。因此，進行了初步穩定性的研究，進行影響因素實驗，包括強光照射、高溫和高濕度實驗。

2．2．1高溫實驗將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，分別于40℃和60℃恒溫箱內放置10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對比，記錄產品的性狀、內容物色澤和含量的變化，結果見表2［高溫實驗：40℃（A）、60℃（B）］。實驗結果表明：本品分別在40℃和60℃高溫條件下放置19天，各項指標均無明顯變化。表2高溫實驗結果

2．2．2高濕實驗將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，分別放置于含氯化鈉飽和溶液（相對濕度為75%）及硝酸鉀飽和溶液（相對濕度為92.5%）密閉容器中，在25℃的恒溫條件下放置10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對比，記錄產品的性狀、內容物色澤和含量的變化，結果見表3［氯化鈉的飽和溶液：（C），硝酸鉀的飽和溶液：（D）］。實驗結果表明：在高溫條件下放置10天，吸濕性強但仍在5％之內，其他各項指標均無明顯變化。表3高濕實驗結果

2．2．3光照實驗將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，放置于光櫥內，于光照4000LX燈下，光照10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對比，記錄樣品的性狀、內容物色澤和含量的變化，結果見表4。實驗結果表明：在強光條件下放置10天，各項指標均無明顯變化。表4光照實驗結果

3結果與討論

苯酚-硫酸顯色法測定百參口服液中的多糖，操作簡單，靈敏度高，在線性關系、穩定性及回收率等方面令人滿意，可用于百參口服液的含量測定。

苯酚-硫酸法測定多糖含量的原理是糖在濃硫酸作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，此物質能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，在490nm處有最大吸收峰，故可用比色法在此波長處進行測定。在對多糖進行含量測定時，濃硫酸加入方式的選擇：實驗發現，加入濃硫酸的操作方法是影響顯色結果的主要因素。常規加入方法引起顯色結果不平行，采用移液管懸空，垂直加入濃硫酸，立即搖勻的方式，都能得到穩定的顯色結果，高溫、高溫和光照實驗表明多糖制劑質量穩定。

【參考文獻】

1許士凱．現代抗衰老中藥復方制劑研究進展．現代中西醫結合雜志，2005，14（13）：1669-1671．

2賴賓．中藥及天然藥物中多糖類成分藥理研究概況．首都醫藥，2001，（5）：52．

3可世麟，趙春桂．苯酚－硫酸比色定糖法的應用．生物化學與生物物理進展，1986，（5）：68-69．