百參口服液中多糖含量測(cè)定

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【摘要】測(cè)定百參口服液中的多糖含量以及穩(wěn)定性。方法采用苯酚-硫酸顯色法對(duì)多糖進(jìn)行含量測(cè)定；對(duì)口服液做影響因素實(shí)驗(yàn)，測(cè)定其在高溫、高溫和光照條件下的穩(wěn)定性。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定多糖的含量。結(jié)果多糖的線性范圍2～10μg/ml，相關(guān)系數(shù)r=0.9991，加樣回收率為98.59%，RSD為0.81%，初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，口服液在高溫、高濕和光照條件下穩(wěn)定。結(jié)論苯酚-硫酸顯色法測(cè)定百參口服液中的多糖，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，多糖制劑質(zhì)量穩(wěn)定。

【關(guān)鍵詞】百參口服液多糖含量測(cè)定穩(wěn)定性

【Abstract】ObjectiveTodetermineandstudyoncontentandstabilityofthepolysaccharideofbaishenoralliquid.MethodsThemethodofphenol-sulfuricwasusedtodeterminethepolysaccharidecontentandtheinfluencingfactorexperimentwasdonetodeterminethestabilityunderhightemperature,highhumiditylevelandilluminationcondition.ThecontentofpolysaccharidewasdeterminedbyUV-spectrophotometry.ResultsThelinearrangewas2～10μg/ml（r=0.9991）,theaveragerecoverywas98.59%withRSD=0.81%.Thepreliminarystabilityresearchindicatedthatbaishenoralliquidwasstableunderhightemperature,highhumiditylevelandilluminationcondition.ConclusionThemethodofphenol-sulfurictodeterminethepolysaccharidecontentissimpleandhighsensitivity.Thepreparationofpolysaccharidehasstablequality.

【Keywords】baishenoralliquid;polysaccharide;contentdetermination;stability

百參口服液是以百合、沙參、玉竹、山藥等藥材組成，具有抗衰老、提高免疫力的功效，用于提高生活質(zhì)量，起主要作用的是其多糖成分，研究表明多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老等多種藥理作用［1，2］。本文對(duì)百參口服液用苯酚-硫酸法［3］對(duì)有效成分多糖進(jìn)行含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于百參口服液的質(zhì)量控制。現(xiàn)報(bào)告如下。

1儀器與試藥

UV-1型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；FA2004電子分析天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）；101-1型恒溫干燥箱（江蘇省金壇市大地儀器廠）；百參口服液（自制）；D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品，試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1含量測(cè)定采用苯酚-硫酸法對(duì)百參口服液中的多糖進(jìn)行含量測(cè)定，以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品。

2．1．15%苯酚溶液的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g，碳酸氫鈉0.05g，蒸餾收182℃餾分，稱取此餾分10g，加蒸餾水190g，溶解，搖勻，置于棕色瓶中備用。

2．1．2葡萄糖對(duì)照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，置于100ml容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，備用。

2．1．3供試品液的制備精密稱取干燥至恒重的粉末100ml置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。移取1.0ml樣品溶液置于50ml容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度搖勻，搖勻，備用。

2．1．4吸收波長(zhǎng)的選擇精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1ml，置于10ml具塞刻度試管中，精密加入5％苯酚溶液1.0ml,然后迅速精密加入濃硫酸5.0ml，搖勻，微振5min，定容，置于沸水浴中加熱15min，取出，置于冷水中冷卻30min，取出，定容。在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定在440～512nm波長(zhǎng)之間的吸光度。吸收結(jié)果見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，在490nm處有最大吸收，故選擇在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定。

2．1．5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸收葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置于50ml容量瓶中，加入蒸餾水并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各濃度溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度試管中，分別加入5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，搖勻，微振5min，定容。置于沸水浴中加熱15min，然后至冷水浴中冷卻30min，取出，定容。隨行空白。在490nm處測(cè)定吸光度A值。以葡萄糖用量（濃度）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖2。數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理后，得回歸方程y=13.138x+0.0147，r=0.9991。由圖2可見(jiàn)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品在2～10μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2．1．6多糖含量的測(cè)定精密稱取樣品溶液0.5ml，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度值，計(jì)算葡萄糖的質(zhì)量濃度，得出換算因子f。然后精密吸取供試品溶液2.0ml，置于10ml具塞刻度試管中，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下的方法，測(cè)定吸光度A值（平行測(cè)定3次）。按照公式：多糖含量=C×D×f／W×100％（C：樣品溶液的葡萄糖的質(zhì)量；D：樣品溶液的稀釋倍數(shù)；f：換算因子；W：樣品的質(zhì)量）經(jīng)計(jì)算，求得供試品中多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為87.6％。

2．1．7精密度試驗(yàn)精密吸取多糖供試品溶液2.0ml，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度A值，平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD=1.39％，表明用該方法測(cè)定樣品中多糖的含量精密度良好。

2．1．8穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液適量，按照“供試品溶液的制備”及“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下的方法，測(cè)定吸光度A值，每隔1h測(cè)定1次，共測(cè)5次。RSD=1.03％，表明供試品4h內(nèi)穩(wěn)定。

2．1．9回收率試驗(yàn)精密稱取多糖樣品6份，每份500mg，精密稱定，置于50ml容量瓶中，分別加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.5ml，加入蒸餾水至刻度，搖勻，制得供試品溶液，按照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下的方法操作，測(cè)定吸光度A值。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)公式（回收率=實(shí)驗(yàn)測(cè)值-供試品所含被測(cè)成分量/加入葡萄糖的量）換算得出平均回收率為98.59%，RSD為0.81%。見(jiàn)表1。表1回收率測(cè)定結(jié)果

2．2百參口服液穩(wěn)定性的研究對(duì)藥物制劑的基本要求應(yīng)該是安全、有效、穩(wěn)定。藥物制劑穩(wěn)定性對(duì)保證制劑安全有效是非常重要的。因此，進(jìn)行了初步穩(wěn)定性的研究，進(jìn)行影響因素實(shí)驗(yàn)，包括強(qiáng)光照射、高溫和高濕度實(shí)驗(yàn)。

2．2．1高溫實(shí)驗(yàn)將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，分別于40℃和60℃恒溫箱內(nèi)放置10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對(duì)比，記錄產(chǎn)品的性狀、內(nèi)容物色澤和含量的變化，結(jié)果見(jiàn)表2［高溫實(shí)驗(yàn)：40℃（A）、60℃（B）］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本品分別在40℃和60℃高溫條件下放置19天，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化。表2高溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．2．2高濕實(shí)驗(yàn)將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，分別放置于含氯化鈉飽和溶液（相對(duì)濕度為75%）及硝酸鉀飽和溶液（相對(duì)濕度為92.5%）密閉容器中，在25℃的恒溫條件下放置10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對(duì)比，記錄產(chǎn)品的性狀、內(nèi)容物色澤和含量的變化，結(jié)果見(jiàn)表3［氯化鈉的飽和溶液：（C），硝酸鉀的飽和溶液：（D）］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在高溫條件下放置10天，吸濕性強(qiáng)但仍在5％之內(nèi)，其他各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化。表3高濕實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．2．3光照實(shí)驗(yàn)將樣品置小瓶中，攤成5mm厚，放置于光櫥內(nèi)，于光照4000LX燈下，光照10天，于0、5、10天分別取樣檢查，和0天樣品對(duì)比，記錄樣品的性狀、內(nèi)容物色澤和含量的變化，結(jié)果見(jiàn)表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在強(qiáng)光條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化。表4光照實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3結(jié)果與討論

苯酚-硫酸顯色法測(cè)定百參口服液中的多糖，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，在線性關(guān)系、穩(wěn)定性及回收率等方面令人滿意，可用于百參口服液的含量測(cè)定。

苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量的原理是糖在濃硫酸作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，此物質(zhì)能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，在490nm處有最大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定。在對(duì)多糖進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，濃硫酸加入方式的選擇：實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，加入濃硫酸的操作方法是影響顯色結(jié)果的主要因素。常規(guī)加入方法引起顯色結(jié)果不平行，采用移液管懸空，垂直加入濃硫酸，立即搖勻的方式，都能得到穩(wěn)定的顯色結(jié)果，高溫、高溫和光照實(shí)驗(yàn)表明多糖制劑質(zhì)量穩(wěn)定。

【參考文獻(xiàn)】

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