復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜大黃素含量測(cè)定

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【摘要】目的建立用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素的含量。方法采用HPLC法,色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。結(jié)果大黃素在0.04～0.4μg/ml（r=0.9998）范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。大黃素平均回收率分別為98.25%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜；大黃素；高效液相色譜法

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofemodinincompoundornidazole-rhubarbbuccalfilmbyHPLC.MethodsAHPLCmethodwasusedwithAgilentZORBAXSB-C18column（150mm×4.6mm,5μm）.Themobilephasewasmethanol-0.1%phosphoricacid（4:1）.Theflowratewas1.0mL/min.Thecolumntemperaturewas40℃andthedetectionwavelengthwas254nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.04～0.4μg（r=0.9998）.Theaveragerecoverywas98.25%.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate.

【Keywords】compoundornidazole-rhubarbbuccalfilm；emodin；HPLC

牙周炎是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，由厭氧菌感染引起，局部應(yīng)用抗菌藥物對(duì)于牙周病的治療有很好的效果。以往報(bào)道的牙周炎藥膜多以生物不降解的材料為輔料，使用中需要定時(shí)更換。復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜由蘭州大學(xué)藥學(xué)院和蘭州市第一人民醫(yī)院口腔科合作開(kāi)發(fā)作為醫(yī)師協(xié)定處方，治療牙周炎，療效確切。它以?shī)W硝唑?yàn)橹魉?，大黃提取物中蒽醌類(lèi)成分為輔藥，具有活血化淤、消炎止痛、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等作用。該口腔膜劑是生物可吸收性牙周炎藥膜，應(yīng)用時(shí)不需要更換藥膜，可被機(jī)體有效吸收，達(dá)到長(zhǎng)效和加強(qiáng)愈合的作用［1，2］。為有效地控制該口腔膜劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效，本文報(bào)道采用反相高效液相色譜法測(cè)定大黃素含量。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent-1100高效液相色譜儀,G1315A/BDAD檢測(cè)器,G1313ALS自動(dòng)進(jìn)樣器,Agilent-1100色譜工作站（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；BS224型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；0.45μm濾膜（天津Do-Chrom科技有限公司）；臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)，型號(hào)TDL-40B）；SZ-97自動(dòng)三重純水蒸餾器（上海科析亞榮生化儀器廠(chǎng)）；DZKW-4水浴鍋（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)）。

1.2試劑甲醇（色譜純）、磷酸（分析純）、水（重蒸餾純凈水）、大黃素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：0854-200532）。

復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜的制備［3］：按2：1稱(chēng)取PVA17-88和CMC-Na，分別加適量蒸餾水浸泡12h，使其充分溶脹。再將PVA和CMC-Na分別置85℃～95℃水浴上加熱溶解后混合，過(guò)濾備用。按處方量稱(chēng)取奧硝唑溶于熱蒸餾水中，稱(chēng)取大黃提取物溶于90%乙醇中，并將它們加入備用的成膜材料漿液中，加入甜蜜素、甘油，適量水至規(guī)定量，攪拌均勻后，于超聲儀中超聲30min脫泡后，傾入預(yù)先涂有少量液體石蠟的玻璃板上，于凈化室內(nèi)鋪膜，避光，50℃～60℃干燥，啟膜，在紫外燈下照射15min滅菌，在凈化臺(tái)上分割成1cm×0.5cm藥膜（每片含大黃提取物約50mg，奧硝唑約1mg），密封包裝（燙封于聚乙烯薄膜中）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動(dòng)相:甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）；流速:1.0ml/min；柱溫:30℃；檢測(cè)波長(zhǎng):254nm，進(jìn)樣量10μl。

2.2試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品各5mg分別于兩個(gè)50ml量瓶中,加甲醇溶解制成0.1mg/ml大黃素儲(chǔ)備液,各取上述溶液2ml于10ml量瓶中,加甲醇定容,即得含大黃素（20mg/L）對(duì)照品溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜10cm2（含大黃酚9.49mg），剪碎，置50ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，超聲30min使膜完全溶解，取上清液10ml于離心管中，以4000r/min離心10min，取上清液5ml，置燒瓶中,揮去甲醇,加2.5mol/L的硫酸溶液10ml,超聲5min,加氯仿10ml,置水浴中加熱回流水解1h,冷卻,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,燒瓶用少量氯仿潤(rùn)洗3次,用氯仿振搖萃取3次,每次10ml,合并氯仿液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,減壓蒸餾揮去氯仿,殘?jiān)眉状既芙?移至10ml量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備除大黃外,按“儀器與試藥”制備復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜陰性樣品，再按樣品溶液的制備制成陰性溶液。

2.2.4大黃對(duì)照藥材溶液取大黃對(duì)照藥材按樣品溶液制備方法制備,即得。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取樣品溶液、陰性樣品溶液、大黃對(duì)照藥材溶液和大黃素對(duì)照品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣10μl,結(jié)果陰性樣品對(duì)大黃素測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.4線(xiàn)性關(guān)系精密吸取含大黃素對(duì)照品溶液2、4、8、10、14、16、20μl按上述色譜條件依次進(jìn)樣,以對(duì)照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo),峰面積Y為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程:Y=3140.50X-6.10,r=0.9998。結(jié)果表明,大黃素進(jìn)樣量在0.04～0.4μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)取同一濃度對(duì)照品溶液,在相同色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次,結(jié)果大黃素峰面積的RSD為0.42%（n=5）。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品溶液,分別于0、2、4、6、8、10、12h時(shí)進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,結(jié)果大黃素的RSD為1.20%（n=7）,表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（071103）復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜樣品,按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定,結(jié)果測(cè)得大黃素含量為0.9495mg/cm,RSD為1.25%（n=6）。

2.8加樣回收試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜（大黃素0.9495mg/cm）5份，分別精密加入大黃素儲(chǔ)備液1ml,同“2.2.2”處理,測(cè)定峰面積,計(jì)算回收率。見(jiàn)表1。表1大黃素回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測(cè)定取2批復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜,分別按2.2.2項(xiàng)下處理后,進(jìn)樣10μl,測(cè)定峰面積，計(jì)算大黃素含量。見(jiàn)表2。表2樣品含量測(cè)定

3討論

在選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí),取大黃素對(duì)照品溶液在200～360nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,結(jié)果在254nm波長(zhǎng)處有最大吸收,且樣品中其他成分在此波長(zhǎng)處對(duì)測(cè)定無(wú)干擾,靈敏度高,可準(zhǔn)確測(cè)定大黃素,故測(cè)定波長(zhǎng)選定254nm。

選擇樣品處理方法時(shí),參考文獻(xiàn)資料［4，5］,比較了幾種處理方法,實(shí)驗(yàn)證明,本文用的樣品處理方法,其分離度好,無(wú)干擾,峰信號(hào)較強(qiáng)。

采用HPLC法測(cè)定復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素含量,該法分離度好,靈敏度高,穩(wěn)定性好,可作為其質(zhì)量控制方法。

【參考文獻(xiàn)】

1李淑娟，董曉華，武海霞，等.大黃及其有效成分藥理作用研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述，2005，11（1）:76.

2MunozE,CastellaJ,GutierrezJF.InvivoandinvitrosensitivityofTrichomonasgallinaetosomenitroimidazoledrugs.VetParasitol,1998,78（4）:239.

3安媛，孫德江.奧硝唑口腔膜劑的制備及質(zhì)量控制.中國(guó)藥房，2005，16（12）：908-909.

4國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，354-355.

5劉臘娥,陳立新,楊長(zhǎng)成,等.HPLC測(cè)定潔康舒洗劑中大黃酸、大黃素及黃酚的含量.中成藥,2004,26（9）：710-713.