復方奧硝唑大黃口腔膜大黃素含量測定

前言：本站為你精心整理了復方奧硝唑大黃口腔膜大黃素含量測定范文，希望能為你的創作提供參考價值，我們的客服老師可以幫助你提供個性化的參考范文，歡迎咨詢。

【摘要】目的建立用高效液相色譜（HPLC）法測定復方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素的含量。方法采用HPLC法,色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,檢測波長為254nm。結果大黃素在0.04～0.4μg/ml（r=0.9998）范圍內線性關系良好。大黃素平均回收率分別為98.25%。結論該方法操作簡便、快速、準確。

【關鍵詞】復方奧硝唑大黃口腔膜；大黃素；高效液相色譜法

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofemodinincompoundornidazole-rhubarbbuccalfilmbyHPLC.MethodsAHPLCmethodwasusedwithAgilentZORBAXSB-C18column（150mm×4.6mm,5μm）.Themobilephasewasmethanol-0.1%phosphoricacid（4:1）.Theflowratewas1.0mL/min.Thecolumntemperaturewas40℃andthedetectionwavelengthwas254nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.04～0.4μg（r=0.9998）.Theaveragerecoverywas98.25%.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate.

【Keywords】compoundornidazole-rhubarbbuccalfilm；emodin；HPLC

牙周炎是一種常見病、多發病，由厭氧菌感染引起，局部應用抗菌藥物對于牙周病的治療有很好的效果。以往報道的牙周炎藥膜多以生物不降解的材料為輔料，使用中需要定時更換。復方奧硝唑大黃口腔膜由蘭州大學藥學院和蘭州市第一人民醫院口腔科合作開發作為醫師協定處方，治療牙周炎，療效確切。它以奧硝唑為主藥，大黃提取物中蒽醌類成分為輔藥，具有活血化淤、消炎止痛、促進創面愈合等作用。該口腔膜劑是生物可吸收性牙周炎藥膜，應用時不需要更換藥膜，可被機體有效吸收，達到長效和加強愈合的作用［1，2］。為有效地控制該口腔膜劑的內在質量，確保臨床療效，本文報道采用反相高效液相色譜法測定大黃素含量。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent-1100高效液相色譜儀,G1315A/BDAD檢測器,G1313ALS自動進樣器,Agilent-1100色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）；BS224型電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ5200DB型數控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；0.45μm濾膜（天津Do-Chrom科技有限公司）；臺式離心機（上海安亭科學儀器廠，型號TDL-40B）；SZ-97自動三重純水蒸餾器（上海科析亞榮生化儀器廠）；DZKW-4水浴鍋（上海實驗儀器廠）。

1.2試劑甲醇（色譜純）、磷酸（分析純）、水（重蒸餾純凈水）、大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號：0854-200532）。

復方奧硝唑大黃口腔膜的制備［3］：按2：1稱取PVA17-88和CMC-Na，分別加適量蒸餾水浸泡12h，使其充分溶脹。再將PVA和CMC-Na分別置85℃～95℃水浴上加熱溶解后混合，過濾備用。按處方量稱取奧硝唑溶于熱蒸餾水中，稱取大黃提取物溶于90%乙醇中，并將它們加入備用的成膜材料漿液中，加入甜蜜素、甘油，適量水至規定量，攪拌均勻后，于超聲儀中超聲30min脫泡后，傾入預先涂有少量液體石蠟的玻璃板上，于凈化室內鋪膜，避光，50℃～60℃干燥，啟膜，在紫外燈下照射15min滅菌，在凈化臺上分割成1cm×0.5cm藥膜（每片含大黃提取物約50mg，奧硝唑約1mg），密封包裝（燙封于聚乙烯薄膜中）。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動相:甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）；流速:1.0ml/min；柱溫:30℃；檢測波長:254nm，進樣量10μl。

2.2試驗溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品各5mg分別于兩個50ml量瓶中,加甲醇溶解制成0.1mg/ml大黃素儲備液,各取上述溶液2ml于10ml量瓶中,加甲醇定容,即得含大黃素（20mg/L）對照品溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取復方奧硝唑大黃口腔膜10cm2（含大黃酚9.49mg），剪碎，置50ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，超聲30min使膜完全溶解，取上清液10ml于離心管中，以4000r/min離心10min，取上清液5ml，置燒瓶中,揮去甲醇,加2.5mol/L的硫酸溶液10ml,超聲5min,加氯仿10ml,置水浴中加熱回流水解1h,冷卻,轉移至分液漏斗中,燒瓶用少量氯仿潤洗3次,用氯仿振搖萃取3次,每次10ml,合并氯仿液,用無水硫酸鈉脫水,減壓蒸餾揮去氯仿,殘渣用甲醇溶解,移至10ml量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜（0.45μm）濾過,取續濾液,即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備除大黃外,按“儀器與試藥”制備復方奧硝唑大黃口腔膜陰性樣品，再按樣品溶液的制備制成陰性溶液。

2.2.4大黃對照藥材溶液取大黃對照藥材按樣品溶液制備方法制備,即得。

2.3系統適應性試驗取樣品溶液、陰性樣品溶液、大黃對照藥材溶液和大黃素對照品溶液,在上述色譜條件下進樣10μl,結果陰性樣品對大黃素測定無干擾。見圖1。

2.4線性關系精密吸取含大黃素對照品溶液2、4、8、10、14、16、20μl按上述色譜條件依次進樣,以對照品進樣量X（μg）為橫坐標,峰面積Y為縱坐標作標準曲線,得回歸方程:Y=3140.50X-6.10,r=0.9998。結果表明,大黃素進樣量在0.04～0.4μg范圍內具有良好的線性關系。

2.5精密度試驗取同一濃度對照品溶液,在相同色譜條件下重復進樣5次,結果大黃素峰面積的RSD為0.42%（n=5）。

2.6穩定性試驗取同一樣品溶液,分別于0、2、4、6、8、10、12h時進樣,測定峰面積,結果大黃素的RSD為1.20%（n=7）,表明樣品溶液在12h內穩定性良好。

2.7重復性試驗取同一批號（071103）復方奧硝唑大黃口腔膜樣品,按樣品含量測定方法測定,結果測得大黃素含量為0.9495mg/cm,RSD為1.25%（n=6）。

2.8加樣回收試驗精密稱取已知含量的復方奧硝唑大黃口腔膜（大黃素0.9495mg/cm）5份，分別精密加入大黃素儲備液1ml,同“2.2.2”處理,測定峰面積,計算回收率。見表1。表1大黃素回收率試驗結果

2.9樣品測定取2批復方奧硝唑大黃口腔膜,分別按2.2.2項下處理后,進樣10μl,測定峰面積，計算大黃素含量。見表2。表2樣品含量測定

3討論

在選擇檢測波長時,取大黃素對照品溶液在200～360nm波長范圍內掃描,結果在254nm波長處有最大吸收,且樣品中其他成分在此波長處對測定無干擾,靈敏度高,可準確測定大黃素,故測定波長選定254nm。

選擇樣品處理方法時,參考文獻資料［4，5］,比較了幾種處理方法,實驗證明,本文用的樣品處理方法,其分離度好,無干擾,峰信號較強。

采用HPLC法測定復方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素含量,該法分離度好,靈敏度高,穩定性好,可作為其質量控制方法。

【參考文獻】

1李淑娟，董曉華，武海霞，等.大黃及其有效成分藥理作用研究進展.醫學綜述，2005，11（1）:76.

2MunozE,CastellaJ,GutierrezJF.InvivoandinvitrosensitivityofTrichomonasgallinaetosomenitroimidazoledrugs.VetParasitol,1998,78（4）:239.

3安媛，孫德江.奧硝唑口腔膜劑的制備及質量控制.中國藥房，2005，16（12）：908-909.

4國家藥典委員會.中國藥典一部.北京：化學工業出版社，2005，354-355.

5劉臘娥,陳立新,楊長成,等.HPLC測定潔康舒洗劑中大黃酸、大黃素及黃酚的含量.中成藥,2004,26（9）：710-713.