TK對腦缺血NGF的影響研究

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本文作者：邊穎1王金春1商艷君2作者單位：1.沈陽市第五人民醫院神經內一科2.遼寧工業大學醫院內科

檢測指標及方法

1神經功能缺失評分

實驗前先對大鼠進行訓練，采用神經損傷評分［4］(NSS)。術后第1天，NSS8～12分的大鼠進入本實驗。術后第1、3、7天，對3組大鼠進行評分及方差分析。

2腦梗死體積測定

將大腦由額極至枕極分為5枚腦片，2mm/片，立即置于2%TTC(紅四氮唑)溶液中，37℃水浴30min，4%多聚甲醛固定30min。顯微圖像分析系統采集每片腦切片上、下面圖像，分析每片腦切片上、下面腦梗死面積。根據梯形法則計算腦梗死體積。

3免疫組化染色

梗死后3d，將大鼠用10%水合氯醛麻醉，4%多聚甲醛心內灌注后取腦，固定24h，組織脫水包埋。在梗死灶中心部位，相當于以前囟為中心，冠狀面+1～－1mm，每隔100μm，連續7μm切片5張，對NGF進行免疫組化染色。一抗為兔抗NGF(1∶200)，二抗為生物素化羊抗兔IgG。顯色底物為DAB顯色劑。

4NGF測定

將染色后的腦組織切片取梗死周圍皮質，進行顯微圖像采集、分析(MetaMorph/DP10/BX41)，記錄經過處理軟件包量化后的灰度值。

5統計學方法

用SPSS11.0統計軟件做方差分析。數據以均數±標準差(x珋±s)表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1NSS評分

3組神經功能缺損減輕。tk組第3天NSS評分與其他2組的差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2動物模型經切片、TTC(紅四氮唑)染色見圖1～圖2。

3腦梗死體積的比較

3組均有梗死灶形成，但TK組梗死灶體積(30.54%±3.47%)較NS組、空白對照組(38.43%±5.73%，39.67%±4.98%)明顯減輕(P＜0.05)。

4缺血區NGF免疫組化結果

大腦中動脈閉塞后腦缺血區ngf增多，而注射TK后，NGF細胞明顯增多，TK組與其他2組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2及圖3～圖4。

討論

有學者提出，腦組織缺血性損傷早期，如果KKS受到激活而參與一系列的生理生化反應，可以加重腦組織損傷，原因為KKS增加通透性和腦水腫［6］。Zausinger等［7］研究顯示，在局灶性腦缺血前30min給予激肽B2受體拮抗劑(LF16－0687MS)，可加快缺血性腦組織的功能恢復。另外，Xia等［8］提出，在腦組織缺血后8h，給予不同的治療，結果不同:注射人TK基因可使大鼠缺血性腦梗死的體積縮小;而LF16－0687MS能加重缺血性腦梗死的再灌注損傷。得出不同的結論與TK治療的時間有關:TK在早期可使腦水腫加重，但后期卻能通過抑制細胞凋亡而起到神經保護作用。倪耀輝等［9］研究顯示，在大鼠腦缺血再灌注后8h給予TK，對腦缺血有明顯的治療作用，可減輕炎性反應，同時還能降低梗死灶內的細胞凋亡;明顯增加缺血區神經細胞、神經膠質細胞和血管上皮細胞的增生。因此，推斷TK是通過促進血管、神經組織再生以及抑制局灶缺血區的細胞凋亡、炎性反應而發揮治療作用［10－11］。

本研究顯示，在大鼠大腦中動脈閉塞再灌注后8h注射TK，可改善大鼠的神經功能缺損，并減少大鼠腦梗死體積，使腦缺血區NGF表達增多。結果表明，在腦缺血較晚期，TK有明顯的治療效果。另外，應用TK治療能明顯增加缺血區的NGF表達，表明腦梗死時，TK有促進神經細胞再生的作用。NGF能加速神經元生長、分化及維持其功能，在腦內能保護神經元抵御很多類型的損傷。因此，得出結論，通過保護神經元、促進軸突再生而減輕中樞神經系統損傷。這為臨床應用TK治療缺血性腦梗死提供了重要的理論依據。