HPLC法測定安坤益母草片鹽酸水蘇堿含量

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【摘要】目的建立安坤益母草片中鹽酸水蘇堿的含量測定方法。方法采用氨基柱，以乙腈-水（體積比78∶22）為流動(dòng)相，檢測波長是202nm，流速是1mL·min-1，柱溫是30℃。結(jié)果鹽酸水蘇堿在5.625～28.125μg內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r＝0.9992，回收率為100.3％，RSD為2.4％。結(jié)論本法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確、簡便，可為安坤益母草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】安坤益母草片；高效液相色譜法；鹽酸水蘇堿

安坤益母草片是由作者經(jīng)由安坤益母草膏改劑型而得，由益母草、川芎、白芍、地黃、當(dāng)歸等藥材組成。具有養(yǎng)經(jīng)調(diào)血、化淤生新的功效，臨床上主要用于血淤氣滯引起的月經(jīng)不調(diào)、行經(jīng)腹痛、量少色暗、產(chǎn)后淤血不凈等癥，取得滿意效果。益母草是方中君藥，鹽酸水蘇堿是有效成分之一，其測定方法有雷氏鹽沉淀溶解比色法［1］、紫外分光光度法［2］、薄層掃描法［3］、hplc法［4］等。為更好地控制制劑質(zhì)量，確保臨床療效，本文采用HPLC法測定鹽酸水蘇堿的含量，結(jié)果表明方法專屬性強(qiáng)、精密度高、分離度好，可用于控制安坤益母草片中鹽酸水蘇堿的含量測定。

1儀器與試藥

WATERS2695-2996型高效液相色譜儀（美國）。安坤益母草片（自制）；鹽酸水蘇堿對照品（批號：712-9903，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：氨基柱（250mm×4.6mm,5μm），大連依利特公司；流動(dòng)相：乙腈-水（體積比78∶22）；流速：1mL·min-1；檢測波長：202nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：15μL。在此條件下，供試品中鹽酸水蘇堿峰能達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)應(yīng)不低于4000，分離度均是3.6。見圖1～3。

圖1鹽酸水蘇堿對照品HPLC圖譜（略）

Fig.1HPLCchromatogramofstachydrinehydrochloride

圖2安坤益母草片HPLC圖譜（略）

Fig.2HPLCchromatogramofAnkunMotherworttablets

圖3安坤益母草空白片HPLC圖譜（略）

Fig.3HPLCchromatogramofblankcontrolofAnkunMotherworttablets

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸水蘇堿對照品11.25mg置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，得到1.125mg/mL的鹽酸水蘇堿對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備取本品5片（0.25g/片），除去薄膜衣，研細(xì)，精密稱取0.25g，置具塞錐形瓶中，精密加入20mL乙醇，超聲處理30min，濾過，濾渣及容器用20mL乙醇分次洗滌，濾過，合并濾液，蒸干，殘?jiān)右掖既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL的量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心（5000r/min，5min），取上清液作為供試品溶液。

2.2.3鹽酸水蘇堿空白供試液的制備按處方稱取除益母草外的藥材提取，取處方比例輔料，按安坤益母草片制備工藝制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制得空白對照供試液。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取鹽酸水蘇堿對照品溶液(1.125mg/mL)5、7、10、15、20、25μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定鹽酸水蘇堿色譜峰面積，以鹽酸水蘇堿微克數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=5.89×104x-1.52×104(r=0.9992)，線性范圍：5.625～28.125μg。

2.4干擾試驗(yàn)

按“2.1”色譜條件，取鹽酸水蘇堿對照品溶液、供試品溶液、空白供試液，分別注入液相色譜儀，結(jié)果表明供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)位置上，有一相同的色譜峰，而空白供試液在此保留時(shí)間內(nèi)不出峰，表明其他成分對測定鹽酸水蘇堿無干擾。

2.5精密度試驗(yàn)

取對照品溶液(1.125mg/mL)15μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄鹽酸水蘇堿的峰面積。結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積RSD＝0.8％。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述供試品溶液15μL，分別在0、2、4、8、16、24h進(jìn)樣，記錄鹽酸水蘇堿的峰面積，結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積的RSD=1.2%(n=6),表明供試品溶液在制備后24h內(nèi)測定基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批安坤益母草片(批號:20070412)6份,按“2.2.2”項(xiàng)方法處理樣品并測定鹽酸水蘇堿峰面積,計(jì)算鹽酸水蘇堿含量，結(jié)果RSD=1.7%，表明此方法測定鹽酸水蘇堿含量重復(fù)性好。

2.8加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品(批號20070406，鹽酸水蘇堿含量10.8mg/片)6份，每份取樣量為供試品取樣量（0.25g/片）的50％，按“2.2.2”項(xiàng)方法操作，以當(dāng)前取樣含量的1∶1，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品溶液（1.08mg/mL）5mL，制備加樣回收供試品溶液，按含量測定條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1鹽酸水蘇堿回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)（略）

Tab.1RecoveryofStachydrineHydrochloride

2.9樣品測定

取5批（批號20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10個(gè)樣品，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果安坤益母草片鹽酸水蘇堿平均含量是10.33mg/片。

3討論

鹽酸水蘇堿結(jié)構(gòu)中既含有堿性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，極性大，在常規(guī)的C18柱中難保留［5］。以常規(guī)的生物堿分析方法很難將鹽酸水蘇堿分離，最后參考文獻(xiàn)［6］改用氨基柱，以乙腈-水（體積比78∶22）為流動(dòng)相，在此條件下，鹽酸水蘇堿不僅能得到較好的保留，而且與其他峰完全分離，分離度達(dá)到要求。

【參考文獻(xiàn)】

［1］徐履琴.用硫代氰酸鉻銨剩余比色法測定益母草中生物堿［J］.中草藥,1985,(11):7-8.

［2］盧日剛.分光光度法測定益母草沖劑中生物堿的含量［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1986,21(9):522-524.

［3］周世玉，徐智明.薄層掃描法測定益母草膏中鹽酸水蘇堿的含量［J］.華西藥學(xué)雜志,1999,14(5-6):395-396.

［4］楊雪萍，何召允.HPLC法測定安宮止血顆粒中鹽酸水蘇堿的含量［J］.江西中醫(yī)藥，2007，38（2）：51.

［5］嚴(yán)優(yōu)芍，李衛(wèi)民，高英，等.HPLC法測定益母草不同制劑中水蘇堿［J］.中草藥，2006，37（1）：70-72.

［6］秦永平，毛興榮，梁茂植，等.RP-HPLC法測定產(chǎn)婦安口服液中水

蘇堿的含量［J］.華西藥學(xué)雜志,2003,18(4):287-290.