小龍蝦研究論文：小龍蝦5-HT與DA分布研究
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本文作者：魏華1,2沙曉姣1陳阿琴1唐建清3夏愛軍3作者單位：1上海海洋大學水產與生命科學學院2上海農林職業技術學院3江蘇省淡水水產研究所
結果
Ⅰ期卵巢5-HT陽性物質主要集中在卵母細胞胞質(陽性細胞呈棕色)，胞核未出現陽性反應。Ⅱ～Ⅳ期5-HT陽性物質主要集中在卵母細胞胞質以及胞核(圖1)。Ⅰ～Ⅱ期卵巢中DA陽性物質均分布于卵母細胞的胞質與胞核，Ⅲ～Ⅳ期陽性物質只在胞核(圖2)。克氏原螯蝦的肝胰腺由許多具有盲端的肝小管組成，肝小管主要由胚細胞(E)、泡狀細胞(B)、吸收細胞(R)和纖維細胞(F)4種上皮細胞構成［17］。在各個發育時期，肝胰腺中5-HT的免疫陽性物質主要分布在胚細胞(E)、泡狀細胞(B)、吸收細胞(R)和纖維細胞(F)四類細胞的胞核和胞質，且胞核與胞質的陽性強度相當(圖3)。在各個發育時期，肝胰腺中DA陽性物質主要分布在胚細胞(E)、泡狀細胞(B)、吸收細胞(R)和纖維細胞(F)四類細胞的胞核和胞質，強度有遞減趨勢(圖4)。設計的陰性對照未見免疫陽性反應(圖5)。
2卵巢與肝胰腺中5-HT與DA的陽性強度
對各期克氏原螯蝦卵巢和肝胰腺進行5-HT與DA免疫組化染色發現，5-HT與DA在不同卵巢發育期的卵巢和肝胰腺細胞陽性表達強度不同。根據DAB染色的深淺，分為強陽性、中等陽性、弱陽性、陰性，分別表示為“+++”、“++”、“+”、“－”［18］。Ⅰ期卵巢5-HT陽性物質主要在卵細胞胞核、卵原細胞胞核以及濾泡細胞，且均為強陽性，卵細胞胞質、卵原細胞胞質未見陽性分布。Ⅱ期、Ⅲ期卵巢卵細胞胞核與濾泡細胞均有陽性物質分布且為強陽性。Ⅳ期卵巢卵細胞胞核與濾泡細胞均呈強陽性，陽性位點減少。5-HT在各期肝胰腺細胞R細胞與B細胞中均有分布，且均為強陽性，Ⅲ～Ⅳ期肝胰腺F細胞5-HT呈強陽性表達(表1)。DA在卵巢與肝胰腺中的陽性強度與5-HT略有差別，Ⅰ期卵巢DA陽性位點分布在卵細胞胞質與胞核、濾泡細胞，強陽性，Ⅱ期卵巢陽性部位主要在卵細胞胞質與胞核、濾泡細胞，為強陽性，卵細胞胞質中的陽性位點數較Ⅰ期相對減少。Ⅲ期卵巢陽性位點分布在卵細胞胞核以及濾泡細胞，且均呈強陽性。Ⅳ期卵巢陽性位點分布在卵細胞胞核以及濾泡細胞，也為強陽性，陽性位點有減少的趨勢。各期肝胰腺細胞均有DA的陽性物質分布，強度遞減(表2)。
討論
15-HT與DA在卵巢組織中的分布
本研究通過免疫組化技術研究了5-HT與DA在卵巢和肝胰腺中的分布。目前有關5-HT與DA在甲殼動物卵巢中的分布已有報道，但是在不同動物之間存在諸多差異，比如，5-HT在日本新糠蝦Ⅰ～Ⅲ期卵巢中分布于濾泡細胞、卵母細胞胞質和卵母細胞核，Ⅳ期卵巢中未出現5-HT陽性細胞［18］。5-HT在斑節對蝦Ⅰ～Ⅳ期卵巢中分布于濾泡細胞、卵母細胞和皮質棒［10］。本研究發現5-HT在克氏原螯蝦卵巢主要分布于卵細胞胞質與胞核，且在胞核中總體呈遞增趨勢，與5-HT在斑節對蝦卵巢發育中變化趨勢相同，而與5-HT在日本新糠蝦［19］發育卵巢中變化趨勢相反。5-HT在克氏原螯蝦卵細胞胞質強度亦呈遞增趨勢，與5-HT在日本新糠蝦發育卵巢中變化趨勢相反。Yotsawan等［19］使用免疫熒光法發現南美白對蝦除卵巢組織外，在中央神經系統也有5-HT分布。Garnerot等［20］研究結果表明在雙殼類的性腺與消化腺組織均有5-HT陽性物質的分布。南美白對蝦Ⅰ期卵巢的DA陽性物質主要分布在早期卵黃合成期的卵母細胞胞質，而卵原細胞以及濾泡細胞中則無陽性細胞，Ⅱ～Ⅳ期卵巢僅在卵母細胞胞質有陽性細胞分布［9］。這與本研究結果DA在克氏原螯蝦卵巢發育各時期的卵細胞中的陽性表達相似。羅氏沼蝦［9］與南美白對蝦［19］卵巢內5-HT含量隨著卵巢發育呈上升趨勢，DA含量隨著卵巢發育呈下降趨勢，且不同發育期間存在顯著差異。本研究發現DA在克氏原螯蝦卵母細胞呈遞減趨勢，與羅氏沼蝦、南美白對蝦發育卵巢中的DA含量變化趨勢相同。綜上所述，隨著卵巢的發育，5-HT在卵母細胞中的分布呈遞增趨勢，DA呈遞減趨勢。這可能與所選材料的種類不同有關，也可能是因為卵巢組織除卵母細胞外，還有間質以及結締組織等的存在［21］，本研究只是對克氏原螯蝦卵巢組織卵母細胞做5-HT與DA的定量研究，關于這方面的研究還需完善。
25-HT與DA對卵巢發育的調節作用
利用高效液相色譜和免疫組化法已經從神經系統、卵巢和血淋巴中檢測出5-HT和DA的分布，并且在鋸緣青蟹腦、胸神經團和視神經節已檢測出5-HT神經細胞［12］。本研究證實5-HT與DA陽性細胞在卵母細胞的分布隨卵巢發育變化而變化，在卵巢與肝胰腺中，5-HT含量總體呈現遞增趨勢，DA含量變化正相反。提示5-HT與DA可能和卵巢發育之間的關系密切，證實5-HT對卵巢發育的促進作用，DA對卵巢發育的抑制作用。卵巢Ⅰ期，卵巢與肝胰腺組織中DA陽性強度基本相當，Ⅱ～Ⅳ期5-HT陽性強度稍高于DA。從Ⅱ期開始，卵巢、肝胰腺中5-HT在量上逐漸積累，DA含量降低。5-HT的促進作用占主導作用，卵巢逐漸趨于成熟。本研究結果中，卵母細胞和肝胰腺細胞DA陽性強度變化極其相似，均隨卵巢的發育呈遞減趨勢。表明甲殼動物卵母細胞的發育與肝胰腺可能也有密切關系［17］，其調節機制還有待于進一步的研究。此外，一些其他激素也參與5-HT與DA對甲殼動物卵巢發育的調節，如Homola等［22］等在蜘蛛蟹大顎器的解聚細胞培養液中添加5-HT，結果顯示10－8mol/L5-HT抑制了20%～30%甲基法尼酯(MF)的合成，表明5-HT作為神經調質調控MF的合成。Santhoshi等［23］發現，注射5-HT能顯著提高印度明對蝦體內卵黃蛋白原水平，Yotsawan等［9］認為注射DA顯著降低了羅氏沼蝦血淋巴內卵黃蛋白原的含量。表明卵巢中5-HT與DA含量波動與卵巢發育成熟相關，這可能也是克氏原螯蝦卵巢成熟的調節機制之一。5-HT與DA是克氏原螯蝦卵巢發育過程中的兩種重要的胺類，它們與各種激素之間的相互作用有待于更進一步的研究證實。
