化學(xué)發(fā)光免疫法測定胰島素

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【摘要】目的探討測定胰島素（IRI）的可靠方法。方法采空腹血不抗凝，離心分離成血清，直接上機(jī)測定。結(jié)果線性范圍在0～335.0mIU/L；靈敏度：0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。特異性：測定質(zhì)控血清時(shí)，測定值在靶值的95%～105%范圍內(nèi)。精密度：N=60CV≤5%。結(jié)論化學(xué)發(fā)光免疫法測定胰島素（IRI），靈敏度高，特異性好，精密度高，是一種可靠而穩(wěn)定的檢測方法。

【關(guān)鍵詞】胰島素（IRI）；光量子數(shù)；前胰島素原；胰島素原；化學(xué)發(fā)光免疫法

【Abstract】ObjectiveToexploreareliablemethodforthedeterminationofinsulin.MethodsGatherfastingagglutinatingblood,centrifugalizethemrespectivelytogettheserum,whichweredirectlysetoninstrumenttodetermine.ResultsLinearrang:0～335.0mIU/L，senitivity:themeanquantumof0mIU/LIRI,10.1mIU/LIRI,152.0mIU/LIRIand335.0mIU/LIRIwere3808,30350,357399and684567.Specificity:whenthecontrolserumwasdetermined,themeasurevlaluewaswithinthestandarddeviation（SD）,95%-105%.Precision:N=60CV≤5%.ConclusionChemiluminescenceisareliable,stablemeasurementmethodfordeterminationofinsulinwithhighsensitivity,precisionandspecificity.

【Keywords】insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質(zhì)激素，這是由胰島中的β細(xì)胞所合成、儲存和分泌的。IRI的功能是調(diào)節(jié)血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細(xì)胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個(gè)氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRIA鏈?zhǔn)怯?1個(gè)氨基酸組成，B鏈?zhǔn)怯?0個(gè)氨基酸組成；而C-肽是由31個(gè)氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產(chǎn)生應(yīng)答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規(guī)診斷方法，但是IRI水平的檢測對于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細(xì)胞分泌功能異常患者的意義非常大［2，3］。

1材料與方法

1.1原理IRI的測定是一種直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和雙抗體兩點(diǎn)夾心免疫分析法相結(jié)合的測定方法。第一種抗體稱為標(biāo)識抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標(biāo)記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價(jià)鍵的方式與順磁性顆粒相結(jié)合形成的。血清中的胰島素與相應(yīng)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生光量子，其光量子數(shù)的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2儀器與試劑儀器：BAERACS-180型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標(biāo)準(zhǔn)液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3方法取血清于樣品杯中，置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，調(diào)整好檢測參數(shù)：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對反應(yīng)杯進(jìn)行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)發(fā)光，讀取光量子數(shù)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出結(jié)果。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制備采用兩點(diǎn)定標(biāo)法，將標(biāo)準(zhǔn)血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標(biāo)位置上，編入測定程序，上機(jī)測定自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2結(jié)果

2.1精密度取混合血清分成兩份，一份當(dāng)天測定60次，結(jié)果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對應(yīng)的CV值為1.8%；另一份做批間試驗(yàn)，測定10次，測定統(tǒng)計(jì)值為21±1.2mIU/L，其對應(yīng)的CV值為2.8%。

2.2靈敏度0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。IRI測定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3回收試驗(yàn)在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進(jìn)行回收試驗(yàn),分別測得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4線性分析對一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測定體系光量子數(shù)的變化量，即為IRI與光量子數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：IRI在本法的測定范圍是0～335.0mIU/L。當(dāng)IRI大于335.0mIU/L時(shí)，開始偏離線性。因此對濃度高的標(biāo)本必須先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專缓鬁y定。

2.5干擾試驗(yàn)當(dāng)溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時(shí),對結(jié)果干擾甚微。

2.6正常參考值取100份經(jīng)我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測結(jié)果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無顯著性（P>0.05）。

3討論

目前定量測定IRI的方法不多，過去一般用放射免疫法，該法測定步驟繁瑣，為半自動(dòng)化操作，測定時(shí)間長達(dá)3天，測定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對操作人員造成身體傷害及對周圍環(huán)境形成污染。現(xiàn)在基本已被化學(xué)發(fā)光免疫法所代替，該法測定步驟簡單，為全自動(dòng)化操作，測定時(shí)間短，全過程最短為半小時(shí)即可完成，而它使用的試劑安全無放射性，為一般化學(xué)試劑，對操作人員無傷害，對周圍環(huán)境污染甚微。不過它也有缺點(diǎn)：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標(biāo)周期短，一般為2周。在試劑的有效期內(nèi)和定標(biāo)周期內(nèi)，對血清標(biāo)本進(jìn)行測定，其結(jié)果非常準(zhǔn)確可靠。綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法測定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

【參考文獻(xiàn)】

1康格非,巫向前.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)，第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001，256.

2ChevenneD,TrivinF,PorquetD.Insulinassaysandreferencevalues.DiabetesMetab，1999，25（6）：459-476.

3McAuleyKA,WilliamsSM,MannJI,etal.Diagnosinginsulinresistanceinthegeneralpopulation.DiabetesCare,2001,24（3）:460-464.