鹽酸多巴胺注射液有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

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【摘要】目的篩選合適的高效液相色譜條件，測(cè)定鹽酸多巴胺注射液的有關(guān)物質(zhì)。方法采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法，采用RPHPLC；色譜柱為DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相為［0.005mol/mL十二烷基硫酸鈉冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二鈉(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；柱溫：40℃；流速：1.20mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。結(jié)果在1～12μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）；最低檢測(cè)限為0.9997ng。結(jié)論該法專(zhuān)屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確，靈敏，可用于鹽酸多巴胺注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查。

【關(guān)鍵詞】RPHPLC法；鹽酸多巴胺注射液；有關(guān)物質(zhì)

鹽酸多巴胺（dopaminehydrochloride）注射液的有關(guān)物質(zhì)檢查，中國(guó)藥典［1］中并沒(méi)有收載。英國(guó)藥典中收載的滅菌多巴胺濃溶液和注射用鹽酸多巴胺采用薄層色譜法，需用鹽酸甲基多巴胺對(duì)照品（4Omethyldopaminehydrochloride和3Omethyldopaminehydrochloride）測(cè)定系統(tǒng)適用性［2］。本文采用HPLC法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，方法準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可作為本品的有關(guān)物質(zhì)檢查方法，更有效的對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。

1儀器與試藥

TU1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，美國(guó)Waters1525高效液相色譜儀，日本ShimadzuLC10Avp高效液相色譜儀。甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸鈉和乙二胺四醋酸二鈉均為分析純?cè)噭?。鹽酸多巴胺注射液由廣州白云山明興制藥有限公司提供，批號(hào)為050107，050501，060703。

2色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：［0.005mol/mL十二烷基硫酸鈉冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二鈉(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；流速：1.2mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；理論板數(shù)按鹽酸多巴胺峰計(jì)算為3600。在以上色譜條件下，鹽酸多巴胺保留時(shí)間約為5min，見(jiàn)圖1。

A.酸性破壞試驗(yàn)B.堿性破壞試驗(yàn)C.加熱破壞試驗(yàn)D.氧化破壞試驗(yàn)E.光照破壞試驗(yàn)F.溶解介質(zhì)氧化破壞試驗(yàn)G.溶解介質(zhì)堿性破壞試驗(yàn)

圖1鹽酸多巴胺降解產(chǎn)物色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatogramsofdecompositionproductsofdopaminehydrochloride

3方法與結(jié)果

3.1方法的專(zhuān)屬性考察

取鹽酸多巴胺對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成每1mL中含300μg的溶液，取5mL置試管中，加熱30min進(jìn)行加熱破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸溶液2滴，加熱30min后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH溶液調(diào)為中性作為酸性破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH溶液2滴，加熱30min后加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%鹽酸溶液調(diào)為中性作為堿性破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的過(guò)氧化氫2滴，加熱30min作為氧化破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，在紫外燈366nm下光照1h作為光照破壞試驗(yàn)；同時(shí)做溶解介質(zhì)的破壞性試驗(yàn)。各取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果酸性和堿性對(duì)鹽酸多巴胺有明顯的破壞，溶解介質(zhì)約在1.1min和1.4min有雜質(zhì)峰，擬定的色譜條件對(duì)分解產(chǎn)物與主峰有良好的分離，表明方法的專(zhuān)屬性強(qiáng)，見(jiàn)圖1。

3.2方法的耐用性考察

選用DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）、江蘇漢邦C18（4.6mm×250mm，5μm）、AlltechC18（4.6mm×150mm，5μm）色譜柱等3種不同品牌不同填料的C18色譜柱，取破壞性溶液進(jìn)樣，結(jié)果3種色譜柱對(duì)分解產(chǎn)物與主峰均能達(dá)到有效分離。

3.3線(xiàn)性范圍

精密稱(chēng)取鹽酸多巴胺對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1mL含1～12μg的11個(gè)溶液，依法測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖，求得回歸方程：Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）。鹽酸鹽多巴胺在1～12μg/mL范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

3.4檢測(cè)限

按上述色譜條件，以信噪比為3∶1對(duì)檢出限進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得鹽酸多巴胺在此條件下的檢出限為0.9997ng。

3.5供試品的測(cè)定

精密量取本品適量，加流動(dòng)相稀釋成每1mL中含300μg的溶液作為供試品溶液；精密量取1mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。量取對(duì)照溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，鹽酸多巴胺峰的保留時(shí)間約在5min，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰的峰高為記錄儀滿(mǎn)量程的20％～25％。再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸多巴胺保留時(shí)間的3倍。供試品溶色譜圖見(jiàn)圖2，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

A.空白溶劑B.1%對(duì)照溶液C.樣品

圖2鹽酸多巴胺注射液有關(guān)物質(zhì)檢查色譜圖（略）

Fig.2HPLCchromatogramsofdopaminehydrochlorideinjection

表1樣品測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.1Determinationresultsofsample

4討論

4.1取破壞性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下鹽酸多巴胺原溶液（未經(jīng)破壞），照分光光度法在200～360nm范圍內(nèi)掃描，供試品溶液在280nm處有最大吸收，且無(wú)其他干擾，所以將檢測(cè)波長(zhǎng)定為280nm。

4.2按擬定的方法和色譜條件，鹽酸多巴胺經(jīng)酸、堿、氧化、光照、加熱等條件破壞產(chǎn)生的雜質(zhì)有良好的分離，方法可行。主峰保留時(shí)間在5min時(shí)，保留時(shí)間約在3、4、8min處有雜質(zhì)峰。

4.3方法耐用性的考察中選用的3種色譜柱對(duì)分解產(chǎn)物與主峰均能達(dá)到有效分離，表明該法對(duì)色譜柱的選擇無(wú)特殊要求。

4.4經(jīng)測(cè)定3批樣品，單個(gè)雜質(zhì)峰面積均不大于對(duì)照溶液中鹽酸多巴胺峰面積的1.25倍（2.5%）,且沒(méi)有多于一個(gè)雜質(zhì)峰的峰面積大于對(duì)照溶液中鹽酸多巴胺峰的峰面積（2%）。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)國(guó)藥典:2005版二部［Z］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:500.

［2］BP［Z］.2007.2531